大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠uPA的活性形式（33kDa）和酶原形式（55kDa）。预包被抗大鼠uPA单抗（靶向kringle结构域）捕获样本中的uPA，生物素标记的二抗（识别催化结构域）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与uPA浓度正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.2nM）

重组标准品  0-50ng/mL  -80℃  活性uPA（比活性≥10万IU/mg）

血浆稳定液  10mL  4℃  含PAI-1抑制剂

肿瘤裂解液  20mL  -20℃  含1% Triton X-100

纤溶酶原底物  1mL  -80℃  验证活性用（S-2444）

 3. 性能参数

检测范围：0.5-30ng/mL（可扩展至100ng/mL）

灵敏度：0.15ng/mL（基于2SD空白值）

样本兼容性：

最佳：肿瘤组织匀浆（1:5稀释）

适用：血浆（枸橼酸盐抗凝）、尿液（10倍浓缩）

交叉反应：

大鼠uPA：100%

tPA：<0.1%

人uPA：12%（种属交叉）

精密度：

批内CV：5.3-7.1%

批间CV：8.5-10.8%

4. 样本处理规范

4.1 肿瘤组织处理

取50mg肿瘤边缘组织

加入450μL冷裂解液

珠磨仪匀浆（4℃，40Hz，30秒）

4℃ 15000×g离心30分钟

4.2 血浆采集

使用3.2%枸橼酸钠管（1:9抗凝）

立即冰浴，4℃ 3000×g离心15分钟

分装后-80℃保存（≤2次冻融）

4.3 活性验证

阳性对照：HT-1080细胞培养上清

阴性对照：加入10μM amiloride的样本

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.5、1、2.5、5、10、20、30ng/mL

复溶液：含0.01% Tween-80的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（180rpm）

洗板程序：自动洗板机（300μL/孔×6次）

显色终止：2M HSO（50μL/孔）

质控标准

空白OD值：≤0.08

最低检测限：≥0.5ng/mL

活性验证：纤溶酶原激活率≥80%

6. 主要应用方向

肿瘤转移研究：uPA/uPAR系统功能分析

创伤修复：伤口愈合过程监测

纤维化疾病：肺/肝纤维化评估

血栓溶解：溶栓治疗药效评价

7. 注意事项

实验设计

推荐同步检测PAI-1（uPA抑制剂）

必须设置：正常组织对照

干扰控制

避免使用肝素抗凝血（影响uPA活性）

高脂样本需超速离心（12000×g，20min）

数据分析

推荐四参数logistic曲线拟合

肿瘤数据需用总蛋白校正（ng/mg）

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