大鼠磷脂酰肌醇糖生物合成类F蛋白(PIGF)elisa试剂盒

一、核心检测信息

检测目标

特异性定量大鼠血清、胎盘组织匀浆或肿瘤微环境提取物中的 PIGF，一种糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定生物合成途径的关键酶，通过调控GPI修饰蛋白的膜定位参与血管生成、胚胎发育及肿瘤转移。

 检测原理

双抗体夹心ELISA：

预包被抗大鼠PIGF单抗（靶向N端催化结构域）捕获目标蛋白 → 生物素标记二抗（识别C端调控区）结合 → 超敏HRP-TMB显色系统（450nm/630nm双波长校正）。

可选功能验证：通过GPI缺失细胞（如PIGF-KO细胞）补实验证检测到的PIGF活性。

二、技术参数与验证

关键指标  技术说明

检测范围  0.1-20 ng/mL（6梯度点）

最低检测限  0.03 ng/mL（超高灵敏度）

样本兼容性  血清（避免脂血）、胎盘组织裂解液（含1% NP-40）、肿瘤外泌体提取物

特异性验证  不与大鼠PIGA、PIGK交叉

酶活性关联性  可配合GPI合成效率检测（需额外底物）

三、典型应用场景

血管生成研究

子痫前期胎盘组织中PIGF/sFlt-1比值与血管重塑异常的关联

肿瘤生物学

结直肠癌转移灶中PIGF介导的CD24（GPI锚定蛋白）膜定位机制

遗传性疾病

PIGF基因突变导致GPI缺乏症的诊断模型构建

四、操作关键要点

样本处理

外泌体样本：需通过超速离心（100,000×g, 2h）富集后裂解检测

脂血血清：建议使用脂蛋白吸附柱（如Liposorb）预处理

实验优化

高浓度样本需1:10稀释（使用含0.1% Tween-20的HEPES缓冲液）

每板设置阳性对照（过表达PIGF的HEK293细胞裂解液）

五、注意事项

干扰因素

高浓度游离肌醇（＞10mM）会竞争性抑制检测

数据解读

建议联合检测其他GPI合成酶（如PIGO）及下游锚定蛋白（如CD55）

保存规范

未开封试剂盒4℃避光保存（有效期12个月），标准品-80℃分装（含5%海藻糖）

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