小鼠白细胞介素17(IL-17)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测小鼠样本中的白细胞介素17（IL-17）。将特异性抗小鼠IL-17抗体预包被于微孔板中，加入待测样本或标准品后，IL-17与固相抗体结合。随后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。经洗涤后，加入底物TMB显色，在过氧化物酶催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色。颜色的深浅与样本中IL-17浓度呈正相关，通过450 nm波长测定吸光度（OD值），依据标准曲线计算浓度。

样本要求

血清：采集血液后静置30分钟，3000×g离心10分钟，避免溶血或反复冻融。

血浆：建议使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝，3000×g离心30分钟取上清。

细胞上清液：离心去除细胞碎片（3000×g，10分钟）。

组织匀浆：按重量体积比（如1:9）加入生理盐水匀浆，3000×g离心10分钟取上清。

注意：样本需分装保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

试剂盒组成

预包被微孔板（48孔或96孔配置）

IL-17标准品（浓度梯度）

HRP标记检测抗体

洗涤缓冲液（20×浓缩液）

TMB显色底物

终止液（酸性溶液）

说明书及标准曲线模板

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至工作浓度。

加样：每孔加入样本或标准品100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后加入洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次。

加检测抗体：每孔加入HRP标记抗体100 μL，37℃孵育60分钟。

显色：洗涤后加入TMB底物100 μL，避光反应15-30分钟。

终止与检测：加入终止液50 μL，15分钟内测定450 nm OD值。

注意事项

不同批次试剂不可混用。

避免底物接触金属或氧化剂。

若样本浓度超出标准曲线范围，需适当稀释后复测。

计算与结果

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，通过四参数拟合（或对数拟合）计算样本浓度。

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