人摄食抑制因子1(NES1)ELISA试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA），用于定量检测人血清、血浆、细胞上清液等样本中的NES1蛋白含量。检测原理基于抗原-抗体特异性结合及酶催化底物显色反应，灵敏度可达pg/ml级别，重复性良好。

自备仪器与试剂

仪器：酶标仪（450nm波长）、离心机、恒温孵育箱（37℃）、微量加样器及吸头。

试剂：蒸馏水（配制标准品及洗涤液）、去离子水（稀释浓缩洗涤液）。

试剂盒组分与配制

标准品：使用前每管加入400μl蒸馏水溶解。

浓缩洗涤液：按1:20比例用重蒸水稀释，若有结晶需加热溶解。

其他组分：预包被酶标板、底物液、终止液（含2M硫酸）、样品稀释液等。

操作步骤

样本准备：

血清：室温凝固30分钟后离心（1000×g，15分钟），分装保存于-20℃。

血浆：EDTA抗凝，30分钟内离心（1000×g，15分钟），避免反复冻融。

实验流程：

平衡试剂：实验前20分钟将试剂盒置于室温（20-25℃）。

标准曲线制备：

设8孔，首孔加入100μl标准品，倍比稀释至第7孔，第8孔为空白对照。

加样与孵育：每孔加入100μl样本或标准品，37℃孵育后洗涤。

显色与终止：每孔加入100μl底物液（37℃避光反应5-10分钟），50μl终止液混匀。

检测：450nm波长读取吸光度（OD值），需扣除空白值。

结果计算

以标准品浓度（1000-15.62 pg/ml）为X轴（对数坐标），OD值为Y轴绘制标准曲线。

根据样本OD值从曲线中计算NES1浓度。

注意事项

质量控制：建议所有样本及标准品做复孔，每次实验需重新制备标准曲线。

试剂保存：

板条开封后需密封防潮，未用板条保存于4℃。

底物液若变蓝则失效，禁止使用。

安全提示：

终止液含2M硫酸，避免与叠氮化钠废物混合。

不同批号试剂不可混用。

操作规范：避免接触酶标板底部，防止读数偏差。

技术原理

基于抗原-抗体特异性结合，通过酶标记放大信号，最终显色强度与样本中NES1浓度成正比。

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