人肾肿瘤抗原(RAGE)ELISA试剂盒

商品属性

检测原理

采用双抗体夹心法：

抗RAGE抗体预包被于酶标板，样本/标准品中的RAGE与之结合。

加入生物素化检测抗体，形成抗体-抗原-生物素化抗体复合物。

加入SA-BC（链霉亲和素-生物素）复合物放大信号。

加入TMB显色底物，蓝色显色后终止液变黄色。

在450nm波长下测OD值，RAGE浓度与OD值成正比（需绘制标准曲线计算浓度）。

样本要求

适用样本类型：血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液、尿液等。

样本处理：

液体样本（血清/血浆）：避免溶血或高血脂，4℃离心（3000rpm, 10min），分装后-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

组织样本：液氮速冻后匀浆，离心取上清分装保存。

细胞培养上清：1500rpm离心10min后立即分装冻存。

试剂盒组分（以96T为例）

| 名称 | 规格（96T） |

| 预包被酶标板 | 8×12条 |

| 标准品 | 1支 |

| 标准品/样品稀释液 | 15ml |

| 生物素化检测抗体（100×）| 120μl |

| SABC复合物 | 12ml |

| TMB显色液（A/B） | 各6ml |

| 终止液 | 12ml |

| 20×浓缩洗涤液 | 60ml |

| 保存条件：4℃避光（生物素化抗体工作液需现用现配）。

关键参数

检测范围：0.156–10ng/mL

最低检测限：0.066ng/mL

保质期：12个月

操作流程

标准品稀释：用稀释液进行7梯度对倍稀释（1/2至1/64），设置空白对照。

洗涤液配制：20×浓缩洗涤液按1:20蒸馏水稀释（示例：1ml浓缩液+19ml水）。

加样与孵育：

每孔加标准品/样本100μl，37℃孵育90分钟。

洗涤后加生物素化抗体（1×工作液），37℃孵育60分钟。

加SA-BC复合物，37℃孵育30分钟。

显色与终止：

加TMB显色液避光孵育15分钟（蓝色）。

加终止液（黄色），30分钟内测OD450值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD450值为纵坐标绘制曲线，拟合方程计算样本浓度。

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