人肌肌酸激酶(CKM)ELISA试剂盒

原理概述

试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA），基于辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗进行检测。HRP与底物反应产生颜色变化，吸光度值与样本浓度正相关。
用途：用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中的GHRL含量或活性。本试剂盒为科研专用，禁止用于临床诊断或治疗。

检测种属：主要适用于人样本；其他种属（如大小鼠、豚鼠、兔子等）的检测需参考对应试剂盒。

使用范围和限制

适用范围：仅供科研实验使用，包括基础研究、药物筛选等，不得用于临床、疾病诊断或治疗。

适用样本类型：人血清、血浆、组织匀浆液及相关液体样本。

限制：操作前需确保样本无微生物污染或溶血，否则可能影响结果准确性。

试剂盒以外所需仪器和试剂

仪器：

酶标仪（450nm波长检测）

移液器（精确到1μL范围）

恒温培养箱（37℃）

计时器

试剂：

蒸馏水（用于标准品溶解）：按需准备。

重蒸水（用于洗涤液稀释）：洗涤液需1:20稀释后再使用。

产品保存和有效期

保存条件：未开封试剂盒需在2~8℃避光保存，最佳温度为6℃。

有效期：自生产日期起6个月内有效。开封后，剩余板条应密封、干燥保存于4℃，并在1个月内用完。

运输条件：建议冷藏运输（2~8℃），避免冻融。

操作步骤（分步指南）

操作前20分钟，将试剂盒取出冰箱平衡至室温（20-25℃）。整个流程约需2-3小时，建议每个样本做复孔以提高准确性。以下步骤基于标准品稀释方法进行：

（注：本操作参考10孔标准曲线方案，确保稀释后的浓度梯度）

步骤1：标准品准备

标准品溶解：向每管标准品中加入400μL蒸馏水，混匀溶解备用。

稀释系列（10孔法）：

在酶标板上设10个标准品孔。

第1孔和第2孔：加原始标准品溶液50μL，混匀。

第3孔和第4孔：从第1/2孔各取50μL加入，混匀，然后弃去50μL。

第5孔和第6孔：从第3/4孔各取50μL加入，加50μL标准品稀释液，混匀。

第7孔和第8孔：从第5/6孔各取50μL加入，加50μL标准品稀释液，混匀。

第9孔和第10孔：从第7/8孔各取50μL加入，加50μL标准品稀释液，混匀后各取50μL弃掉。

（最终各孔均为50μL，浓度梯度：180 ng/L、120 ng/L、60 ng/L、30 ng/L、15 ng/L）

步骤2：样本处理和加样

待测样本按1:10稀释后，每孔加50μL至测试孔。

空白孔加50μL标准品稀释液。

步骤3：孵育和洗涤

将板条置于37℃孵育30分钟。

洗涤：每孔加300μL稀释后的洗涤液（1:20重蒸水稀释），静置30秒，弃液；重复5次，轻拍干。

步骤4：显色和读数

加显色底物液：每孔加50μL TMB底物液（使用前检查：若变蓝则失效，需弃去）。

37℃避光孵育15分钟。

加终止液：每孔加50μL 2M硫酸（注意安全）。

立即用酶标仪读取450nm吸光度值（建议加终止液后10分钟内完成读数）。

步骤5：曲线建立和分析

以标准孔浓度为横轴，吸光度为纵轴，构建标准曲线。

通过曲线计算样本中GHRL浓度（使用相关软件或手动插值）。

注意事项

重复实验：每次测定应制作标准曲线，每个样品和标准孔均做复孔，以减小误差。

试剂处理：

底物液必须在室温下使用，避免过度暴露于光线；若溶液发蓝，表明失效，应立即弃去。

浓缩洗涤液从冰箱取出后可能有结晶，需加热溶解（<40℃）后再稀释。

操作安全：试剂盒含2M硫酸，严禁与含叠氮化钠的废物混合；穿戴实验服、手套和护目镜操作。

板条管理：开封后未用板条需立即密封、干燥保存于4℃，不同批号试剂盒不能混用。

加样技巧：拿取酶标板时，避免触摸板底部或孔壁，防止污染或读数偏差。

质量控制：若空白孔OD值>0.10，表明污染或反应失控，应重做实验。

公司正在出售的产品