人脂肪酸结合蛋白4(FABP4)ELISA试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒采用酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法，用于体外定量检测人血清、血浆、组织匀浆或细胞上清液等样本中脂肪酸结合蛋白4（FABP4）的含量。适用于科研实验，不适用于临床诊断。

实验原理

包被抗体：微孔板预包被抗人FABP4单克隆抗体作为捕获抗体。

抗原-抗体结合：样本中的FABP4与固相抗体结合，洗涤后加入生物素标记的检测抗体形成复合物。

信号放大与显色：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，催化底物TMB显色（蓝色→黄色），颜色深度与FABP4浓度正相关。

检测：酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔（可拆卸）或48孔配置。

标准品：冻干粉2瓶（10 ng/ml），临用前以稀释液复溶，梯度稀释为0.078–10 ng/ml系列浓度。

检测抗体：生物素化抗人FABP4抗体（1×）。

酶结合物：HRP标记链霉亲和素（1×）。

底物溶液：TMB显色液。

终止液：酸性溶液（2N H₂SO₄）。

洗涤缓冲液（20×浓缩液）：需稀释后使用。

样本稀释液：用于标准品及样本稀释。

样本处理要求

血清/血浆：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清；避免反复冻融（建议分装保存于-20℃或-80℃）。

细胞上清液：离心去除颗粒物后直接检测或低温保存。

组织匀浆：按质量体积比（1:9）加入PBS匀浆，离心取上清。

操作步骤

标准品制备：复溶后梯度稀释，静置15分钟。

加样：每孔依次加入标准品或样本（100 μl）、检测抗体（50 μl），37℃孵育1小时。

洗涤：弃液后以洗涤缓冲液洗板5次。

酶结合反应：每孔加入HRP标记物（100 μl），37℃孵育30分钟，再次洗涤。

显色与终止：加入TMB底物（90 μl），避光反应15分钟，终止液（50 μl）终止反应。

检测：450 nm波长读取OD值，绘制标准曲线并计算浓度。

注意事项

保存条件：未开封试剂盒2–8℃保存，有效期6个月；复溶标准品需现配现用。

交叉污染：避免移液枪头重复使用。

显色控制：终止后10分钟内完成检测。

干扰因素：溶血、脂血或反复冻融样本可能影响结果准确性。

性能参数

灵敏度：≤0.078 ng/ml。

检测范围：0.156–10 ng/ml。

精密度：板内、板间变异系数（CV）均<10%。

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