人胃泌素释放肽(GRP)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆或其他相关液体样本中胃泌素释放肽（GRP）的含量，适用于科研用途。

实验原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：

微孔板预包被纯化的抗人GRP抗体，形成固相抗体。

加入待测样本或标准品，样本中的GRP与固相抗体结合。

依次加入生物素化抗人GRP抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，形成复合物。

洗涤后加入底物TMB显色，在HRP催化下产生蓝色产物，酸性终止后转为黄色。

通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），标准曲线法计算样本中GRP浓度。

试剂盒组成

预包被酶联板：96孔（可拆卸）。

标准品：冻干粉2瓶（10,000 pg/ml），临用前以稀释液复溶并梯度稀释（5,000 pg/ml至156 pg/ml）。

生物素化抗体：1瓶。

HRP标记亲和素：1瓶。

浓缩洗涤液（20×）：20 mL/瓶，需稀释后使用。

TMB显色液：避光保存。

终止液（酸性溶液）：1瓶。

样本稀释液：用于标准品复溶及样本预处理。

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，避免反复冻融。

其他体液（如脑脊液、尿液）：需根据实验需求优化处理。

操作步骤

标准品制备：复溶后梯度稀释，静置15分钟内使用。

加样：每孔加入样本或标准品100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液洗板5次。

加生物素化抗体：每孔100 μL，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：洗涤后加入HRP标记亲和素，37℃反应30分钟。

显色与终止：加入TMB避光显色15分钟，终止后30分钟内检测。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过拟合方程计算样本浓度。

注意事项

试剂盒需2-8℃保存，复溶后标准品避免反复冻融。

避免交叉污染，不同步骤更换吸头。

显色时间需严格控制，终止后颜色稳定性有限。

性能参数

检测范围：156–10,000 pg/mL。

灵敏度：<50 pg/mL。

批内/批间变异系数：均<10%。

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