人谷氨酰胺合成酶(GS)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被谷氨酰胺合成酶（GS）抗体的微孔板中依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育和彻底洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在酶催化下转化为蓝色产物，酸化后呈黄色，其颜色深度与样本中GS浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），计算样品活性。

样本要求

样本类型：适用于血清、血浆、组织匀浆液或细胞培养上清液。

预处理：

避免使用含叠氮钠（NaN₃）的样本，因其抑制HRP活性。

液体样本需离心（1000×g，20分钟）后取上清检测。

组织样本需按标准方法匀浆并离心去除杂质。

保存：2–8℃短期保存（≤24小时），长期储存需分装并于-20℃以下冻存，避免反复冻融。

试剂盒组成

包被微孔板：96孔（含GS抗体预包被）

标准品：浓度梯度冻干粉（临用前按说明书稀释）

检测抗体：HRP标记的抗GS抗体

显色底物（TMB）：避光保存

终止液：酸性溶液

洗涤缓冲液：20×浓缩液（需稀释）

说明书及质检报告

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度复溶。

加样：每孔加入样本或标准品50 μL，随后加入检测抗体50 μL，37℃孵育60分钟。

洗涤：弃液后每孔加洗涤液300 μL，重复5次。

显色：每孔加TMB底物90 μL，37℃避光反应15–30分钟。

终止：加入终止液50 μL，立即测定OD值。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本中GS浓度。

注意事项

试剂使用前需平衡至室温，避免反复冻融。

不同批次试剂不可混用。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

性能参数

灵敏度：≤0.1 ng/mL

检测范围：0.5–50 ng/mL

精密度：板内变异系数＜10%，板间＜15%

储存条件

未开封试剂盒2–8℃保存，有效期12个月；开封后微孔板需密封防潮，HRP标记抗体需-20℃保存。

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