人细胞间粘附分子(ICAM)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法。预包被抗人ICAM抗体捕获样本中的靶蛋白，加入HRP标记的检测抗体后形成复合物，通过底物显色反应测定450nm处吸光度（OD值），其强度与ICAM浓度呈正相关。

规格：48T/96T

保存条件：2-8℃避光保存，有效期6个月

试剂盒组成

预包被微孔板（96孔）

ICAM标准品（6浓度梯度，冻干粉或液体）

样本稀释液（40×浓缩液）

HRP标记检测抗体（100×浓缩）

洗涤缓冲液（20×浓缩）

底物A/B（TMB溶液）

终止液（2M硫酸）

封板膜

操作步骤

样本准备

血清/血浆：3000rpm离心10分钟，避免溶血。

细胞上清液：离心去除沉淀。

标准品与样本加样

标准品孔：加入50μL梯度标准品。

样本孔：10μL样本 + 40μL稀释液（终稀释倍数5×）。

空白孔：仅加稀释液。

孵育与洗涤

37℃孵育60分钟 → 弃液 → 每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次。

显色与终止

每孔加底物A/B各50μL，避光反应15分钟。

加终止液50μL，15分钟内测定OD450nm。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线。

样本浓度通过曲线方程计算，最终浓度需乘以稀释倍数。

注意事项

样本处理：避免反复冻融，2-8℃保存不超过48小时，长期保存需-20℃以下。

实验条件：室温平衡试剂30分钟，严格控制孵育时间和温度。

质量控制：建议设置复孔，CV值应＜15%。

废弃物处理：终止液含强酸，需按生化废弃物规范处置。

性能参数

检测范围：0.1-50 ng/mL（具体以实际产品为准）

灵敏度：＜0.05 ng/mL

特异性：与人ICAM-1/ICAM-2无交叉反应

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