人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被人γ干扰素（IFN-γ）抗体的微孔板中依次加入待测样本、标准品及辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，经温育和充分洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色产物，酸化后变为黄色。颜色的深浅与样本中IFN-γ浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长处的吸光度（OD值），依据标准曲线计算样本浓度。

样本要求

血清：采集于无热原、无内毒素的试管中，避免溶血或反复冻融。离心后取上清（建议3000 rpm离心10分钟）。

血浆：使用EDTA或肝素抗凝剂，离心分离血浆。

细胞上清液：去除颗粒物后直接检测或-20℃/-80℃保存。

试剂盒组成

预包被微孔板

IFN-γ标准品（浓度梯度）

HRP标记检测抗体

洗涤缓冲液（浓缩液）

TMB显色底物

终止液（酸性溶液）

封板膜、说明书

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入样本或标准品，37℃孵育30-60分钟。

洗涤：弃液后使用洗涤缓冲液洗板5次。

加酶标抗体：每孔加入HRP标记抗体，37℃孵育30分钟。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟。

终止与检测：加入终止液，30分钟内测定OD450值。

注意事项

实验前需平衡所有试剂至室温（20-25℃）。

避免反复冻融标准品或样本。

严格控制孵育时间和温度，洗涤需彻底以减少非特异性结合。

不同批号试剂不可混用。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合（或对数拟合）计算样本浓度。

性能参数

灵敏度：通常≤0.1 μg/L。

检测范围：1-100 μg/L（具体参考标准曲线）。

特异性：与人其他干扰素亚型（如IFN-α/β）无交叉反应。

储存条件

未开封试剂盒2-8℃保存，有效期12个月；开封后微孔板需密封防潮。

应用范围

本试剂盒适用于科研用途，不可用于临床诊断。

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