人白细胞介素17(IL-17)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。预先包被人IL-11特异性抗体的微孔板中，依次加入待测样本、标准品及辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经洗涤后，加入底物TMB显色，在过氧化物酶催化下产生蓝色产物，酸化后转为黄色。颜色深度与样本中IL-11浓度呈正相关。通过450nm波长测定吸光度（OD值），依据标准曲线计算浓度。

样本要求

血清：无菌采血后静置30分钟，3000×g离心10分钟分离血清，避免溶血或反复冻融。

血浆：建议使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝，3000×g离心30分钟取上清。

细胞培养上清：离心去除颗粒物（3000×g，10分钟）。

组织匀浆：按质量体积比1:9加入生理盐水匀浆，离心后取上清（3000×g，10分钟）。

试剂盒组成

预包被微孔板（48孔或96孔配置）

IL-11标准品（浓度梯度）

HRP标记检测抗体

TMB显色液、终止液

洗涤缓冲液（20×浓缩）

封板膜、说明书

操作步骤

标准品及样本加样（100μL/孔），37℃孵育60分钟。

洗涤5次，加入HRP标记抗体（100μL/孔），37℃孵育30分钟。

再次洗涤，加入TMB显色液（90μL/孔），避光反应15分钟。

加入终止液（50μL/孔），立即于450nm读取OD值。

注意事项

试剂盒需保存于2-8℃，复溶后标准品分装冻存（-20℃）。

避免反复冻融样本，溶血或脂血可能干扰结果。

操作时需佩戴防护用具，TMB为致癌物，接触后立即冲洗。

计算与灵敏度

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，推荐四参数拟合。

检测灵敏度通常为<10 pg/mL，线性范围15-1000 pg/mL（具体以实际批次为准）。

有效期

未开封试剂盒有效期12个月，开封后需按组分要求保存并在1个月内使用完毕。

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