人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒

用途

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液或其他生物液体样本中巨噬细胞移动抑制因子（MIF）的浓度，适用于科研实验。

实验原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：

包被抗体：微孔板预包被高纯度人MIF特异性抗体，形成固相抗体。

样本孵育：加入待测样本，样本中的MIF与固相抗体结合。

酶标抗体：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。

显色反应：洗涤后加入底物TMB，在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸性溶液）作用后转为黄色。

定量分析：450 nm波长下测定吸光度（OD值），OD值与MIF浓度呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

（注：具体组分需以实际产品为准，通常包含以下部分）

预包被微孔板

MIF标准品（梯度浓度）

HRP标记检测抗体

TMB显色液

终止液

洗涤缓冲液（浓缩液）

样本稀释液

封板膜

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃保存避免反复冻融。

细胞上清：离心去除沉淀，立即检测或分装冻存。

避免使用溶血、高脂或浑浊样本。

操作步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释。

加样：每孔加入标准品或样本，37℃孵育。

洗涤：去除未结合物质。

加酶标抗体：37℃孵育后洗涤。

显色：加入TMB避光反应，终止后30分钟内检测。

结果计算

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线，拟合回归方程计算样本浓度。

注意事项

试剂盒需2-8℃保存，复溶后标准品分装冻存。

避免交叉污染，使用一次性吸头。

显色时间需严格控制，终止后颜色稳定性有限。

性能参数

灵敏度：通常≤1.0 pg/mL。

检测范围：1.5-1000 pg/mL（线性范围需验证）。

特异性：与人MIF特异性结合，无交叉反应。

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