大鼠骨桥素(OPN)ELISA试剂盒

样本处理

血清/血浆：采集后离心（3000 rpm, 10分钟），分装保存于-20℃（避免反复冻融）。

组织匀浆：按1:9比例加入PBS匀浆，离心取上清。

细胞上清：离心去除沉淀后直接检测或冻存。

检测方法：双抗体夹心法（ELISA）

用途：定量检测大鼠血清、血浆、细胞上清液或组织匀浆中的OPN蛋白浓度（科研用途，非临床诊断）。

试剂盒组成

预包被微孔板：96孔板（或48孔板），包被抗大鼠OPN单克隆抗体。

标准品：重组大鼠OPN冻干粉（6浓度梯度，需复溶）。

检测抗体：HRP标记的抗大鼠OPN多克隆抗体。

底物溶液：TMB显色液。

终止液：2M硫酸溶液。

洗涤缓冲液：20×浓缩PBS-Tween。

样本稀释液：缓冲盐溶液。

检测步骤

标准品稀释：按说明书梯度稀释至0.5–100 ng/mL。

加样：每孔加入100 μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后加洗涤液洗板5次。

加检测抗体：每孔加入HRP标记抗体，37℃孵育60分钟。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟。

终止与读数：加终止液后，450 nm波长测定OD值。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

通过曲线方程计算样本中OPN浓度。

注意事项

保存条件：未开封试剂盒2–8℃保存，复溶后标准品需分装冻存。

有效期：6个月（见外包装标签）。

交叉反应：与人、小鼠OPN无显著交叉反应。

灵敏度：检测下限≤0.1 ng/mL。

技术参数

批内变异系数：＜10%

批间变异系数：＜15%

线性范围：0.5–100 ng/mL

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