大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒

概述

应用范围：定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中的t-PA含量。

检测原理：采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）：

包被特异性抗体于微孔板；

加入样本或标准品，形成抗原-抗体复合物；

依次加入生物素化检测抗体和HRP标记链霉亲和素；

TMB显色（蓝色→黄色），450nm波长测OD值，浓度与吸光度呈正相关。

存储条件：未开封试剂盒冷藏（2-8℃），避免冻融。

有效期：6个月（生产日期见包装标签）。

试剂盒组成

（以96孔板为例）

包被微孔板：96孔 × 1块

标准品（冻干粉）：2瓶（10000 pg/mL）

样本稀释液：1瓶（20mL）

检测抗体（生物素标记）：1瓶（120μL）

酶结合物（HRP-链霉亲和素）：1瓶（120μL）

TMB底物溶液：1瓶（10mL）

终止液：1瓶（10mL，含稀硫酸）

20×洗涤缓冲液：1瓶（30mL）

封板膜：2张

说明书：1份

样本处理要求

| 样本类型 | 处理步骤 |

| 血清 | 全血室温静置2小时后，1000g离心20分钟，取上清 |

| 血浆 | 抗凝全血（EDTA/肝素），采集后30分钟内1000g离心20分钟 |

| 组织匀浆 | 组织用PBS匀浆后，2000-3000转/分离心20分钟 |

| 细胞上清 | 直接1000g离心20分钟，取上清 |

注意：

避免溶血或反复冻融（-20℃保存需分装）；

浑浊样本需再次离心后检测。

操作步骤

标准品稀释：

冻干粉用1mL样本稀释液溶解（10000 pg/mL）；

梯度稀释：5000 pg/mL、2500 pg/mL → 至156 pg/mL（共7个浓度）。

加样与温育：

标准品/样本孔：加50μL → 空白孔：不加样；

检测抗体：每孔加100μL（空白孔除外）；

封板膜覆盖，37℃孵育60分钟；

洗涤：

手工洗板：倒掉液体，注满1×洗涤缓冲液（20×浓缩液1:20稀释），静置30秒后弃去，重复5次；

显色与终止：

每孔加TMB底物100μL，避光室温（25℃）反应10分钟；

加终止液50μL，颜色由蓝转黄后30分钟内读板（450nm波长）。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐四参数回归法）；

样本浓度 = 标准曲线拟合值 × 稀释倍数。

注意事项

试剂保存：

酶结合物、TMB底物需避光保存，启用后尽快使用；

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤。

操作规范：

不同批次试剂不可混用；

移液枪需精准校准（误差<5%）；

显色时间避免超过30分钟。

应用限制：

仅供科研使用，不适用于临床诊断；

人源/鼠源样本勿交叉检测。

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