大鼠基质金属蛋白酶2(MMP-2)elisa试剂盒

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1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠MMP-2的活性形式（62kDa）和酶原形式（72kDa）。预包被抗大鼠MMP-2单抗（靶向纤维连接蛋白结构域）捕获样本中的MMP-2，生物素标记的二抗（识别催化结构域）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与MMP-2浓度正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.15nM）

重组标准品  0-50ng/mL  -80℃  活化型MMP-2（含Zn2/Ca2）

组织裂解液  20mL  -20℃  含0.1% Triton X-114

血浆稳定剂  5mL  4℃  含EDTA/BB94抑制剂

明胶酶底物  1mL  -20℃  荧光标记明胶（验证用）

3. 性能参数

检测范围：0.156-10ng/mL（可扩展至50ng/mL）

灵敏度：0.05ng/mL（基于3SD空白值）

样本兼容性：

最佳：肿瘤组织匀浆（1:5稀释）

适用：血浆（柠檬酸盐抗凝）、细胞培养上清

交叉反应：

大鼠MMP-2：100%

MMP-9：<0.5%

MMP-14：<0.1%

精密度：

批内CV：3.8-5.6%

批间CV：6.9-8.7%

4. 样本处理规范

4.1 肿瘤组织处理

取50mg瘤体边缘组织

加入450μL冷裂解液

组织研磨仪匀浆（4℃，40Hz，30秒）

4℃ 12000×g离心20分钟

4.2 血浆采集

使用3.2%柠檬酸钠管（1:9抗凝）

立即冰浴，4℃ 3000×g离心15分钟

分装后-80℃保存（避免反复冻融）

4.3 活性验证

阳性对照：HT1080细胞培养上清

阴性对照：加入10mM EDTA的样本

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10ng/mL

复溶液：含5mM CaCl的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温摇床（200rpm）

洗板程序：自动洗板机（350μL/孔×5次）

显色终止：1M HCl（更稳定终止）

质控标准

空白OD值：≤0.05

最低检测限：≥0.15ng/mL

稀释线性：85-115%回收率

6. 主要应用方向

肿瘤转移研究：基底膜侵袭模型

心血管疾病：动脉粥样硬化斑块稳定性

纤维化疾病：肝/肺纤维化评估

创伤修复：创面再上皮化监测

7. 注意事项

实验设计

推荐采样部位：肿瘤侵袭前沿

必须设置：正常组织对照

干扰控制

避免使用肝素抗凝血（影响酶活性）

高脂样本需超速离心（12000×g，30分钟）

数据分析

推荐四参数logistic曲线拟合

组织数据需用总蛋白校正（ng/mg）

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