大鼠基质金属蛋白酶1(MMP-1)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠MMP-1的活性形式（45kDa）和酶原形式（55kDa）。预包被抗大鼠MMP-1单抗（靶向催化结构域）捕获样本中的MMP-1，生物素标记的二抗（识别血红素结合结构域）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与MMP-1浓度正相关。

2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.18nM）

重组标准品  0-20ng/mL  -80℃  活化型MMP-1（含Zn2/Ca2）

组织保护液  15mL  -20℃  含EDTA/BB94抑制剂

血清处理液  10mL  4℃  去除α2-巨球蛋白

酶原激活剂  0.5mL  -20℃  APMA（1mM）

 3. 性能参数

检测范围：0.312-20ng/mL（可扩展至100ng/mL）

灵敏度：0.09ng/mL（基于2.5SD空白值）

样本兼容性：

最佳：关节炎滑膜组织匀浆

适用：血清（需1:5稀释）、创面渗出液

交叉反应：

大鼠MMP-1：100%

MMP-8：<0.5%

MMP-13：<0.1%

精密度：

批内CV：4.8-6.7%

批间CV：7.3-9.9%

4. 样本处理规范

4.1 组织处理

取50mg病变滑膜组织

加入450μL含保护液的Tris-HCl（pH7.6）

超声破碎（冰浴，20kHz，3×10秒脉冲）

4℃ 15000×g离心30分钟

4.2 血清处理

使用硅化采血管

采集后1小时内离心（3000×g，15min）

立即加入处理液（1:4体积比）

4.3 特殊处理

酶原激活：样本与激活剂37℃孵育1小时

活性检测：需用FRET底物验证

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.312、0.625、1.25、2.5、5、10、20ng/mL

复溶液：含10mM CaCl的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（180rpm）

洗板液：含0.05% Tween-20的Hepes缓冲液

显色终止：2M HSO（终止更彻底）

质控标准

空白OD值：≤0.06

最低检测限回收率：90-110%

钩状效应检测：样本稀释线性试验

6. 主要应用方向

关节炎研究：胶原降解评估

创面愈合：肉芽组织MMP-1动态

心血管重塑：心肌梗死后基质重构

肿瘤转移：基质浸润能力分析

7. 注意事项

样本特殊性

避免反复冻融（酶活性损失）

组织样本需快速处理（采集后30分钟内）

干扰控制

含胎牛血清样本需透析处理

高脂样本需超速离心（10000×g，20min）

数据分析

推荐五参数logistic曲线拟合

组织数据需用总蛋白校正（ng/mg）

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