大鼠干扰素γ诱导单核因子(MIg)elisa试剂盒

1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠MIG（CXCL9）的保守CXC结构域。预包被抗大鼠CXCL9单抗（克隆号：MAB556）捕获样本中的MIG，生物素标记的二抗通过链霉亲和素-HRP系统催化超敏TMB显色，450nm吸光度值与MIG浓度呈正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.12nM）

重组标准品  0-2000pg/mL  -80℃  糖基化全长MIG（12kDa）

IFN-γ刺激剂  0.5mL  -20℃  重组大鼠IFN-γ（10μg/mL）

组织保护液  15mL  4℃  含RNase抑制剂

血浆稳定液  5mL  -20℃  含EDTA/蛋白酶抑制剂

3. 性能参数

检测范围：31.2-2000pg/mL（可扩展至8000pg/mL）

灵敏度：8.7pg/mL（基于2.8SD空白值）

样本兼容性：

最佳：IFN-γ刺激的巨噬细胞上清

适用：炎症组织匀浆（1:5稀释）、血浆（肝素抗凝）

交叉反应：

大鼠MIG：100%

小鼠CXCL9：68%

人CXCL9：<0.1%

精密度：

批内CV：4.1-6.3%

批间CV：7.2-9.8%

4. 样本处理规范

4.1 细胞刺激实验

原代腹腔巨噬细胞培养

IFN-γ（20ng/mL）+LPS（10ng/mL）刺激24h

离心（300×g，10min）去除细胞碎片

4.2 炎症组织处理

取病变组织50mg

加入450μL含保护液的PBS

组织研磨仪匀浆（4℃，60Hz，30秒）

12000×g离心15分钟（4℃）

4.3 特殊处理

血浆样本：采集后立即加入稳定剂（1:10）

RNA共分析样本：分装后液氮速冻

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、31.2、62.5、125、250、500、1000、2000pg/mL

复溶液：含0.05% Tween-20的PBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温摇床（180rpm）

洗板液：含0.02% Proclin 300的TBS

显色时间：精确控制8±0.5分钟

质控标准

空白OD值：≤0.05

最低检测限：≥25pg/mL

稀释线性：80-120%回收率

6. 主要应用方向

Th1免疫应答：结核分枝杆菌感染模型

移植排斥：心脏移植急性排斥监测

自身免疫病：实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）

肿瘤免疫：检查点抑制剂疗效评估

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间：刺激后12-48小时

必须设置：未刺激对照、单刺激对照

干扰控制

避免使用EDTA血浆（影响CXCL9稳定性）

高IgG样本需Protein A预处理

数据分析

推荐五参数logistic曲线拟合

组织数据需用总蛋白校正（pg/mg）

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