大鼠簇集蛋白(CLU)elisa试剂盒

                                             大鼠簇集蛋白(CLU)elisa试剂盒
1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠CLU的α链（40kDa）和β链（35kDa）异源二聚体。预包被抗大鼠CLU单抗（靶向β链表位）捕获样本中的CLU，生物素标记的二抗（靶向α链）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与CLU浓度正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力单抗（Kd=0.3nM）

重组标准品  0-50ng/mL  -80℃  糖基化全长CLU（75-80kDa）

脑脊液处理液  10mL  -20℃  含β-淀粉样蛋白抑制剂

尿液稳定剂  5mL  4℃  防蛋白降解配方

高脂样本稀释液  15mL  室温  含脂质吸附剂

3. 性能参数

检测范围：0.5-30ng/mL（可扩展至100ng/mL）

灵敏度：0.12ng/mL（基于3SD空白值）

样本兼容性：

最佳：脑脊液（需去纤维蛋白）

适用：尿液（10倍浓缩）、海马组织匀浆

交叉反应：

大鼠CLU：100%

人CLU：15%（识别保守表位）

载脂蛋白J：<0.1%

精密度：

批内CV：5.2-7.8%

批间CV：8.1-10.3%

4. 样本处理规范

4.1 脑脊液采集

枕大池穿刺取100μL CSF

立即加入等体积处理液

10000×g离心20分钟（4℃）

4.2 脑组织处理

快速分离海马体

按1:19（w/v）加入T-PER组织裂解液

超声破碎（冰浴，10kHz，3×5秒）

4.3 特殊样本处理

尿液：超滤浓缩（10kDa截留）

血清：需去除IgG（Protein G柱）

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、0.5、1、2.5、5、10、20、30ng/mL

复溶液：含0.1% CHAPS的TBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃振荡（200rpm）

洗板程序：自动洗板机（350μL/孔×6次）

显色终止：2M HCl（更稳定终止）

质控标准

空白OD值：≤0.06

钩状效应检测：样本稀释平行性试验

质控品回收率：90-110%

6. 主要应用方向

神经退行性疾病：AD模型脑脊液CLU动态

脑损伤研究：缺血再灌注后神经保护

肿瘤微环境：化疗耐药相关CLU分泌

生殖生物学：精浆CLU与精子质量

7. 注意事项

样本特殊性

脑脊液需避免反复冻融（≤2次）

组织样本需快速冷冻（液氮速冻）

干扰控制

避免使用含的防腐剂

高脂样本需预冷超速离心

数据分析

推荐使用四参数logistic拟合

脑脊液数据需用总蛋白校正

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