大鼠白细胞介素2(IL-2)elisa试剂盒

                                             大鼠白细胞介素2(IL-2)elisa试剂盒
一、核心检测参数

检测靶标：大鼠IL-2（成熟型，15.5kDa）

检测原理：高敏双抗体夹心ELISA（第三代检测技术）

动态范围：10-1000 pg/mL（5个数量级）

灵敏度：<3 pg/mL（可检测单个活化T细胞分泌量）

样本兼容性：

血清/血浆（肝素抗凝最佳）

脾淋巴细胞培养上清

胸腺细胞悬液

移植排斥反应组织匀浆

二、关键技术突破

抗体对设计：

捕获抗体：抗IL-2 N端表位（Clone A7-33）

检测抗体：抗IL-2 C端表位（生物素标记）

防干扰设计：

不识别IL-15（同源蛋白）

排除IL-2受体（CD25）干扰

三、实验方案优化

样本处理规范：

T细胞激活方案：

刺激剂 = ConA(5μg/mL) + PMA(50nM)

培养时间 = 24-48h（检测分泌高峰）

血清采集：

matlab

凝血时间 = 30min@RT

离心条件 = 2000×g,15min,4℃

标准曲线配置：

7点梯度（1000-10 pg/mL）

推荐使用四参数逻辑（4PL）拟合

 四、质量控制标准

参数  验收标准

批内CV  ≤5%

批间CV  ≤8%

回收率  95-105%

保质期  18个月@-20℃

五、前沿应用方向

免疫调控研究：

Treg/Th1/Th17细胞平衡分析

移植免疫耐受监测

肿瘤免疫治疗：

CAR-T细胞疗效评估

免疫检查点抑制剂联合治疗

自身免疫疾病：

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）

类风湿关节炎模型

六、关键操作要点

孵育体系优化：

捕获阶段：4℃过夜（提高灵敏度50%）

检测抗体：37℃ 45分钟（减少非特异结合）

信号放大系统：

SA-HRP稀释度 = 1:8000

TMB显色时间 = 12±2min@RT

七、数据解读系统

生物学意义阈值：

样本类型  基础水平  激活水平

血清  <20pg/mL  >200pg/mL

T细胞上清  50-500pg/mL  >2000pg/mL

多因子联合分析：

关键组合：IL-2 + IFN-γ + IL-4

重要比值：IL-2/IL-10（免疫平衡指数）

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