大鼠β-连环蛋白(β-catenin)elisa试剂盒

一、核心检测信息

检测目标

特异性定量大鼠组织裂解液（如肠、肝、肿瘤）、细胞浆/核提取物或血清中的 β-catenin，一种Wnt信号通路核心效应分子，同时参与细胞黏附连接，其异常积累与肿瘤发生（如结直肠癌）密切相关。

检测原理

双抗体夹心ELISA：

预包被抗大鼠β-catenin抗体（靶向N端降解结构域）捕获目标蛋白 → 生物素标记二抗（识别C端转录调控区）结合 → HRP-链霉亲和素-TMB显色（双波长检测）。

 二、试剂盒核心参数

关键指标  技术说明

检测范围  0.2-40 ng/mL（覆盖胞浆/核蛋白浓度）

最低检测限  0.05 ng/mL（可检测低表达样本）

样本处理要求  组织需裂解后超离心（100,000×g）分离胞浆/核组分，血清需去除纤维蛋白原

动态范围  线性相关系数R2＞0.99

三、典型应用场景

Wnt通路研究

肝癌或肠癌模型中β-catenin核转位与靶基因（如c-Myc）表达的相关性分析

干细胞生物学

胚胎干细胞自我更新过程中β-catenin的磷酸化状态监测

药物筛选

Wnt抑制剂（如ICG-001）对β-catenin/TCF复合物形成的抑制作用评估

四、操作关键要点

样本制备

核蛋白提取：需使用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的核裂解液（如NE-PER试剂盒）

血清样本：建议添加10mM EDTA防止蛋白降解

实验优化

高浓度样本需1:10稀释（使用含1% CHAPS的裂解液）

建议设置磷酸化β-catenin（Ser33/37）对照以区分功能状态

五、注意事项

数据解读

建议联合检测Axin2或Cyclin D1等下游靶基因以验证通路活性

干扰因素

样本反复冻融会导致β-catenin降解，建议分装后-80℃保存

扩展应用

如需检测膜结合型β-catenin（与E-cadherin复合物），需先用非离子 detergent（如Triton X-100）预处理

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