大鼠P-Selectin/CD62Pelisa试剂盒

一、试剂盒基本信息

检测目标：大鼠P-选择素（CD62P）

生物学作用：P-选择素是血小板和内皮细胞活化的标志物，介导白细胞黏附，参与炎症和血栓形成。

检测方法：双抗体夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）

 样本类型：

血小板裂解液（需激活血小板后检测）

血浆（EDTA抗凝，避免血小板激活）

血管内皮细胞培养上清

灵敏度：通常 ≤0.1 ng/mL

检测范围：0.5–50 ng/mL（可覆盖静息与激活状态浓度）

特异性：特异性识别大鼠CD62P，与小鼠、人P-选择素交叉反应低（需确认试剂盒说明）。

二、实验原理

捕获抗体：微孔板预包被抗大鼠CD62P单抗，结合样本中的P-选择素。

检测抗体：加入生物素化或HRP标记的二抗，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大：链霉亲和素-HRP催化TMB显色（蓝色→黄色）。

定量分析：450 nm测OD值，通过标准曲线计算浓度。

三、试剂盒核心组分

组分  说明

预包被96孔板  抗大鼠CD62P抗体固定化

P-选择素标准品  重组大鼠CD62P（冻干粉，需复溶）

HRP标记检测抗体  生物素化或直接酶标

TMB显色液  避光保存，现用现配

终止液（2M HSO）  终止反应，稳定颜色

血小板激活缓冲液*  （部分试剂盒提供，用于阳性对照）

四、操作流程（简化版）

样本处理：

血小板激活：用凝血酶/ADP激活血小板后裂解（避免反复冻融）。

血浆分离：全血采集后立即离心（4℃, 2000×g, 15分钟）。

标准品稀释：梯度稀释（0.5、2、10、20、50 ng/mL）。

加样孵育：样本/标准品加入孔中，37℃孵育1–2小时。

洗涤：洗板3–5次（严格避免残留洗涤液）。

二抗孵育：加入HRP标记抗体，37℃孵育1小时。

显色与检测：TMB反应10–15分钟→终止→测OD450 nm。

五、典型应用场景

血栓性疾病研究：

评估动脉粥样硬化、深静脉血栓模型中血小板/内皮活化状态。

炎症反应监测：

检测败血症、缺血再灌注损伤等过程中的血管炎症反应。

药物开发：

筛选抗血小板药物（如阿司匹林、氯吡格雷）对CD62P表达的抑制作用。

六、关键注意事项

样本采集：

使用塑料器材（避免玻璃激活血小板），全血需冰上操作。

EDTA抗凝血需轻柔混匀，避免溶血。

实验干扰：

高脂血样本可能干扰检测，建议超速离心去除脂蛋白。

质量控制：

设置阳性对照（激活血小板样本）和阴性对照（静息血小板）。

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