大鼠Osteocalcinelisa试剂盒

                                             大鼠Osteocalcinelisa试剂盒
一、试剂盒基本信息

检测目标：大鼠骨钙素（Osteocalcin, OC）

骨钙素是成骨细胞特异性分泌的非胶原蛋白，反映骨形成活性。

检测方法：双抗体夹心ELISA（酶联免疫吸附试验）

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、骨组织匀浆液、细胞培养上清

灵敏度：通常 ≤0.1 ng/mL（高灵敏度可检测低丰度样本）

检测范围：0.5–50 ng/mL（覆盖生理及病理浓度）

特异性：特异性识别大鼠OC，与人、小鼠OC交叉反应低（需确认试剂盒说明）

二、实验原理

捕获抗体：微孔板预包抗大鼠OC抗体，与样本中的OC结合。

检测抗体：加入生物素或HRP标记的二抗，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

信号放大：链霉亲和素-HRP催化TMB显色（蓝色→黄色）。

定量分析：450 nm测OD值，通过标准曲线计算OC浓度。

三、试剂盒核心组分

组分  说明

预包被96孔板  抗大鼠OC抗体固定化，即用型

骨钙素标准品  重组大鼠OC（冻干粉，需复溶稀释）

HRP标记检测抗体  生物素化或直接酶标

TMB显色液  避光保存，现用现配

终止液（2M HSO）  终止反应，稳定颜色

洗涤缓冲液（20×）  PBS含Tween-20，需稀释使用

四、操作流程（简化版）

标准品制备：稀释至0.5、2、5、10、20、50 ng/mL梯度。

加样孵育：样本/标准品加入孔中，37℃孵育1–2小时。

洗涤：洗板3–5次，去除未结合蛋白。

二抗孵育：加入HRP标记抗体，37℃孵育1小时。

显色：加TMB反应10–15分钟（避光）。

终止与检测：加终止液，15分钟内测OD450 nm。

五、典型应用场景

骨代谢研究：

评估骨质疏松症、骨折愈合模型中的骨形成活性。

检测成骨细胞分化标志物（如结合ALP、CTX-1等指标）。

内分泌调控：

研究OC与糖代谢的关系（OC可调节胰岛素敏感性）。

药物开发：

筛选促进骨形成的药物（如甲状旁腺激素类似物）。

六、注意事项

样本处理：

血清/血浆需离心去除颗粒，避免反复冻融（分装保存）。

骨组织需匀浆后离心取上清。

实验优化：

高浓度样本需稀释后检测，避免超出标准曲线范围。

显色时间过长可能导致背景升高。

数据可靠性：

复孔检测，计算CV值（建议<10%）。

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