大鼠Lactoferrinelisa试剂盒

                                             大鼠Lactoferrinelisa试剂盒
1. 基本原理

双抗体夹心ELISA法：试剂盒采用抗大鼠乳铁蛋白特异性抗体包被微孔板，样本中的乳铁蛋白与抗体结合后，再加入酶标记的二抗（如HRP或生物素标记抗体），形成“抗体-抗原-酶标二抗”复合物。通过底物（如TMB）显色，颜色深浅与乳铁蛋白浓度成正比。

 2. 主要组分

预包被微孔板：抗大鼠乳铁蛋白单克隆/多克隆抗体包被的96孔板。

标准品：重组大鼠乳铁蛋白（浓度梯度已知，如0.5–100 ng/mL）。

检测抗体：生物素或HRP标记的抗大鼠乳铁蛋白二抗。

显色底物：TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。

终止液（通常为硫酸或磷酸溶液）。

洗涤缓冲液（如PBS含0.05% Tween-20）。

样本稀释液（避免基质效应）。

3. 检测步骤

加样：标准品和待测样本加入微孔板。

孵育：37℃孵育1–2小时，形成抗原-抗体复合物。

洗涤：去除未结合物质。

加酶标二抗：孵育30–60分钟。

显色：加入TMB底物，避光反应10–30分钟。

终止：加入终止液，颜色由蓝变黄。

检测：450 nm波长测定吸光度（OD值），标准曲线计算浓度。

4. 技术参数

检测范围：通常为0.5–100 ng/mL（不同品牌可能不同）。

灵敏度：最低检测限可达0.1 ng/mL。

特异性：仅识别大鼠乳铁蛋白，不与人、小鼠等物种交叉反应。

重复性：板内和板间变异系数（CV）<10%。

5. 样本要求

样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、乳汁、唾液、细胞上清等。

处理建议：

避免反复冻融（分装保存）。

离心去除颗粒物（如3000 rpm, 10分钟）。

高脂样本需额外处理（如稀释或过滤）。

6. 应用领域

免疫研究：乳铁蛋白在感染、炎症中的调控作用。

肠道健康：评估肠道屏障功能或炎症性肠病模型。

乳腺功能：研究泌乳期蛋白质分泌变化。

药物开发：检测药物对黏膜免疫或铁代谢的影响。

7. 注意事项

避免污染：使用无酶耗材（如低吸附EP管）。

标准曲线：建议每次实验重新绘制。

高浓度样本：需预实验确定稀释倍数，避免超出线性范围。

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