维生素B12(Vb12)elisa试剂盒

1. 概述

维生素B??是含钴的水溶性维生素（分子量1355.4 Da），作为甲硫氨酸合成酶和甲基丙二酰辅酶A变位酶的辅酶，参与造血和神经功能。本试剂盒可检测血清、食品及饲料中的活性B??（甲基钴胺素和腺苷钴胺素），适用于巨幼红细胞性贫血诊断、营养评估及饲料质量控制。

 2. 检测原理

竞争性ELISA（内因子结合技术）：

包被内因子：猪胃源内因子（IF）预包被微孔板

竞争反应：样本中B??与HRP标记B??竞争结合内因子

信号检测：TMB显色，OD450nm值与B??浓度反比（检测范围：50-2000 pg/mL）

3. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T（可拆）  2-8℃  高亲和力IF包被

B??标准品  50-2000 pg/mL  -20℃（避光）  NIBSC 03/178标定

HRP-B??  1.0 mL  -20℃（避光）  纯度>95%

释放剂  10 mL  4℃  含氰化钾（转化羟钴胺素）

阻断剂  20 mL  室温  消除类风湿因子干扰

4. 样本要求

适用样本：

血清/血浆（EDTA抗凝，避免溶血）

乳制品（脱脂处理）

饲料（需热水提取）

强化食品（粉碎均质）

前处理方法：

血清：沸水浴10min释放结合型B??

固体样本：pH4.5乙酸缓冲液提取

检测限：

临床诊断临界值：200 pg/mL

饲料添加检测限：0.1 mg/kg

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5. 实验流程优化

标准曲线建立：

50、100、250、500、1000、2000 pg/mL梯度

四参数logistic拟合（R2≥0.995）

抗干扰措施：

添加阻断剂消除HAMA干扰

避光操作防止光降解

质控要求：

低值质控（150-300 pg/mL）

高值质控（800-1200 pg/mL）

批内CV<7%