小鼠P选择素(P-selection)elisa试剂盒

1. 概述

*P-选择素（P-selectin）**是血小板α颗粒和内皮细胞Weibel-Palade小体储存的黏附分子（分子量140kDa），介导白细胞滚动和血栓形成。作为炎症和血栓启动的关键标志物，其可溶性形式（sP-selectin）的检测对血栓性疾病、动脉粥样硬化和肿瘤转移研究至关重要。

 2. 检测原理

双抗体夹心ELISA（高灵敏度化学发光法）：

捕获抗体：预包被抗小鼠P-selectin单抗（克隆RB40.34）特异性结合sP-selectin

检测抗体：生物素化抗小鼠P-selectin单抗（克隆SARP1）识别不同表位

信号放大：链霉亲和素-碱性磷酸酶（SA-ALP）催化CSPD发光

检测：发光强度（RLU）与sP-selectin浓度正相关（检测范围：0.1-50 ng/mL）

3. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T（可拆）  2-8℃  特殊亲水处理

sP-selectin标准品  0.1-50 ng/mL  -20℃  重组小鼠P-selectin-Fc融合蛋白

生物素化抗体  100 μL  -20℃（避光）  无载体蛋白

SA-ALP  100 μL  2-8℃  RZ>3.2

化学发光底物  10 mL  2-8℃（避光）  动态范围10?

血小板抑制剂  5 mL  -20℃  含前列腺素E1

4. 样本要求

适用样本：

血浆（枸橼酸钠抗凝，采血后立即冰浴）

血栓模型组织匀浆（含1% Triton X-100）

内皮细胞培养上清（无血清）

特殊处理：

避免使用肝素抗凝（激活血小板）

采血后15min内离心（2000g×15min，4℃）

稳定性：

4℃保存≤6h（需加抑制剂）

-80℃可保存3个月（避免反复冻融）

5. 实验流程优化

标准曲线建立：

冻干标准品用0.5mL去离子水复溶

7点梯度稀释（0.1、0.5、1、5、10、25、50 ng/mL）

关键步骤：

加样体积：25μL样本+75μL稀释液

一抗孵育：4℃过夜（提高灵敏度）

化学发光读数：积分时间100ms/孔

质控要求：

空白孔RLU<500

健康小鼠血浆质控（2-10 ng/mL）

DVT模型阳性对照（>30 ng/mL）

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