小鼠颗粒酶B(Granzyme B)elisa试剂盒

一、产品定位

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，专用于定量检测小鼠血清、血浆、细胞裂解液或免疫细胞培养上清中的颗粒酶B活性形式，为评估细胞毒性T细胞（CTL）和NK细胞功能提供关键数据。核心优势：

活性构象检测：特异性识别切割后的活性GZMB（非酶原形式）

超低背景设计：特殊封闭剂避免Fc受体非特异结合

冻干标准品：国际标准品NIBSC 20/150标定

二、技术原理

graph LR

A[活性GZMB] --> B(预包被单抗GB11)

B --> C(生物素化检测抗体GB6)

C --> D(SA-HRP信号放大)

D --> E[化学发光检测]

三、关键参数

参数  指标

检测范围  3.9-250 pg/mL

灵敏度（LLoQ）  1.2 pg/mL

精密度  板内CV<5%，板间CV<8%

样本兼容性  耐受10% FBS

检测时间  70分钟优化流程

四、样本处理方案

免疫细胞上清：

刺激方案：anti-CD3/CD28+IL-2（72h）

收集前6h添加10μM Brefeldin A阻止分泌

组织样本：

脾脏淋巴细胞提取流程

def extract_splenocytes():

homogenize() # 70μm筛网研磨

RBC_lysis()  # ACK裂解液处理

CD8+_sort() # MACS分选（可选）

return CTL_lysate

五、操作流程优化

防降解处理：样本立即加入蛋白酶抑制剂（Complete Mini）

动态检测：

标准曲线范围3.9-1000 pg/mL（可扩展）

化学发光读数（比色法灵敏度10倍）

数据校正：

细胞样本需同步检测总蛋白（BCA法）

计算结果为pg GZMB/mg总蛋白

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