186033-10-3

95% cas 186033-10-3；Digoxigenin-11-UTP，我司供应的产品仅供科学研究使用。

Digoxigenin-11-UTP 是一种重要的分子生物学试剂，主要用于核酸（尤其是RNA）的非放射性标记与检测。

核心功能：核酸标记探针的制备

Digoxigenin-11-UTP 是一种经过化学修饰的核苷酸。其结构特点是：

• UTP部分：是合成RNA的基本构建单元之一（尿苷三磷酸）。

• Digoxigenin部分：一种来源于毛地黄植物的类固醇半抗原，具有极强的免疫原性。

• “11-”连接臂：通过一个11个碳原子的连接臂将地高辛配基连接到UTP的碱基（尿嘧啶）上。这个设计旨在尽量减少地高辛分子对RNA聚合酶识别和利用该核苷酸的干扰。

主要应用领域

1. 原位杂交

• 最常见和经典的应用。用于在组织切片、细胞或染色体标本中定位特定的RNA或DNA序列。

• 原理：在制备RNA探针时，将 Digoxigenin-11-UTP 与普通的 ATP、CTP、GTP 混合，通过体外转录（常用T7、SP6等RNA聚合酶）合成带有地高辛标记的RNA探针。该探针与样品中的目标核酸序列杂交后，再用抗地高辛抗体（通常偶联有碱性磷酸酶AP或荧光基团）进行免疫检测，从而精确定位目标分子的位置。

• 优势：分辨率高，能在形态学完整的细胞中观察基因表达的位置。

2. Northern Blot

• 用于检测特定RNA分子的存在、大小和表达量。

• 用地高辛标记的RNA探针与固定在膜上的RNA进行杂交，然后通过化学发光或显色反应进行检测。其灵敏度可与放射性同位素（如32P）标记相媲美，但更安全、稳定。

3. 斑点/狭缝杂交

• 用于快速检测样品中特定核酸的丰度，无需进行电泳分离。

4. 微阵列分析

• 在基因表达谱芯片中，可用 Digoxigenin-11-UTP 标记的cRNA或cDNA作为靶标，与芯片上的探针杂交后进行检测。

工作原理（简述）

1. 标记：通过酶促反应（如体外转录、随机引物标记、末端标记等，其中体外转录最常用），将 Digoxigenin-11-UTP 掺入到新合成的RNA探针中。

2. 杂交：标记好的探针与目标核酸序列特异性结合。

3. 检测：

• 碱性磷酸酶：加入化学发光底物（如CSPD）或显色底物（如NBT/BCIP），产生可检测的信号。

• 荧光染料（如FITC）：用于荧光原位杂交，直接在荧光显微镜下观察。

• 辣根过氧化物酶：也可用于化学发光或显色检测。

• 使用抗地高辛抗体（一抗）特异性识别并结合探针上的地高辛配基。

• 抗体上偶联有报告分子，如：

主要优势

• 高灵敏度与特异性：抗地高辛抗体与地高辛配基的结合非常特异且紧密，背景噪声低，检测灵敏度高。

• 安全性：完全避免了使用放射性同位素（如32P、3?S）带来的辐射危害和废物处理难题。

• 稳定性：地高辛标记的探针可在 -20°C 下稳定保存数年，而放射性探针会因衰变而失效。

• 多重检测潜力：可以与其他标记系统（如生物素、荧光直接标记）结合，在同一份样品中检测多个靶标。

总结

Digoxigenin-11-UTP 的核心作用是作为一种安全、高效的非放射性标记物，用于制备地高辛标记的RNA探针。这些探针广泛应用于需要高灵敏度核酸检测的实验中，特别是在原位杂交和Northern Blot领域，已成为分子病理学、发育生物学和基因表达研究中的金标准工具之一。