差异脲原体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

差异脲原体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于差异脲原体（如解脲支原体）核酸的定性与定量检测。检测线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL），适用于临床分泌物样本（如尿道或宫颈拭子）的病原体筛查，辅助诊断泌尿生殖道感染。

检测原理

采用特异性引物和荧光染料（如SYBR Green I）与双链DNA结合，通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号变化，实现对目标核酸的定量分析。试剂盒包含耐热DNA聚合酶（Taq酶）、dNTPs及优化反应缓冲体系，确保高灵敏度和特异性。

性能参数

灵敏度：最低检出限为1×10³基因拷贝/mL。

线性范围：10²~10⁷拷贝/μL（标准曲线需用户自行稀释制备）。

内标质控：含阴性质控品与无传染性DNA片段阳性对照，全程监控假阴性风险。

试剂盒组成

PCR反应液：预混dNTPs、缓冲液及荧光染料（936 μL/管）。

阳性对照：非活体DNA片段（1×10⁸拷贝/μL，需梯度稀释）。

阴性质控品：4管/盒，用于排除污染。

DNA提取液：1.4 mL/管×2。

酶混合物：含Taq聚合酶（10.4 μL/管）。

操作步骤

样本处理：

采集分泌物样本（男性尿道或女性宫颈），室温运输（≤8小时），4℃保存不超过72小时，长期保存需-20℃（避免反复冻融）。

标准曲线制备：

标记离心管（7~2号），依次用稀释液将阳性对照按10倍梯度稀释至10⁷~10²拷贝/μL（每步更换枪头，冰上操作）。

PCR扩增：

按20 μL体系配制反应液（含模板DNA、PCR反应液、酶混合物），于荧光定量PCR仪运行程序（建议参数：95℃预变性5分钟，95℃ 15秒→60℃ 60秒，40循环）。

注意事项

防污染：标准品稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。

质控要求：每批次检测需包含阴性质控和至少3个浓度标准品。

设备要求：需配备生物安全柜、高速离心机及荧光定量PCR仪（如SLAN-96P）。

储存与有效期

未开封试剂-20℃保存12个月，避免反复冻融；开封后4℃保存不超过1周。

局限性

仅适用于核酸提取后的检测，需配合规范采样及提取流程。

细菌污染样本可能导致假阴性，需严格拒收标准。

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