拉蒂诺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

拉蒂诺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于 荧光探针法（TaqMan），用于定性检测人血清、咽拭子或肺泡灌洗液样本中的拉蒂诺病毒（Latino Virus, LAV）RNA，适用于临床辅助诊断和流行病学监测。

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA通过核酸提取试剂盒分离纯化。

RT-PCR扩增：

使用特异性引物和荧光探针靶向 LAV N基因保守区域。

探针5'端标记 FAM荧光基团，3'端标记 淬灭基团（BHQ1）。

荧光信号采集：PCR扩增时Taq酶切割探针释放FAM荧光，仪器实时监测荧光强度，通过Ct值判定病毒载量。

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格（96测试） | 储存条件 |

| qRT-PCR预混液（2×） | 1.2 mL × 2管 | -20℃避光 |

| LAV引物探针混合液 | 150 μL × 1管 | -20℃避光 |

| 阳性对照（LAV RNA） | 100 μL × 1管 | -70℃ |

| 阴性对照（DEPC水） | 1 mL × 1管 | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室温 |

检测限（LoD）

95%检测限：50 copies/mL

线性范围：10² ~ 10⁸ copies/mL（R² > 0.99）

特异性

经交叉验证，与以下病原体无交叉反应：

SARS-CoV-2、流感病毒A/B型、呼吸道合胞病毒（RSV）、鼻病毒、腺病毒、EB病毒。

操作步骤

样本前处理

使用配套核酸提取试剂盒提取样本RNA，洗脱体积≤60 μL。

阳性/阴性对照直接取5 μL使用。

PCR反应体系配制

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× qRT-PCR预混液 | 10.0 |

| LAV引物探针混合液 | 1.5 |

| RNA模板 | 5.0 |

| RNase-Free水 | 补足至20 |

扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 45 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

注：推荐使用ABI 7500、Bio-Rad CFX96等荧光定量PCR仪。

结果判读

| 结果类型 | 判定条件（需同时满足） |

| 阳性 | Ct值 ≤ 38.0，且扩增曲线呈S型 |

| 阴性 | Ct值 = Undefined 或 > 38.0 |

| 无效 | 阳性对照Ct > 38.0 或 阴性对照出现扩增 |

注意事项

生物安全：

阳性对照含灭活病毒片段，操作需在BSL-2实验室进行。

废弃物需经121℃高压灭菌30分钟处理。

质量控制：

每批次检测必须包含阴/阳性对照。

建议每样本设置内标（如RNase P） 监控提取效率。

储存与运输：

试剂盒-20℃避光保存（避免反复冻融），有效期12个月。

干冰运输。

局限性说明

检测结果需结合临床表现及流行病学信息综合判断。

低病毒载量（<50 copies/mL）样本可能出现假阴性。

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