拉沙热病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

拉沙热病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒采用SYBR Green I荧光染料法，通过一步式RT-qPCR技术实现拉沙热病毒RNA的高灵敏度检测。试剂盒整合耐热逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶，可在单管内完成cDNA合成与定量扩增，减少污染风险。

产品组分

| 组分编号 | 组分名称 | 20 T规格含量 | 200 T规格含量 |

| A | 2× Advanced SG Buffer | 250 μL | 2×1.25 mL |

| B | UH Enzyme Mix | 20 μL | 200 μL |

| C | RNase-free H2O | 250 μL | 2×1.25 mL |

性能参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或1 pg（中等表达靶标）。

特异性：熔解曲线分析确保扩增产物单一性，避免非特异性扩增。

重复性：复孔间Ct值差异≤0.5（高/中/低浓度模板）。

兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（No Rox/Low Rox/High Rox平台）。

操作流程

反应体系配制（20 μL/反应）：

2× SG Buffer 10 μL

UH Enzyme Mix 0.5 μL

引物（10 μM）各0.4 μL

RNA模板 ≤2 μL

RNase-free H2O 补至20 μL

反应程序：

逆转录：50℃ 15 min

预变性：95℃ 5 min

扩增（40循环）：95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec（信号采集）

熔解曲线分析：60℃~95℃（梯度升温）

数据分析

定量检测：以阳性标准品Ct值绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性判定：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线；

阳性：Ct≤35且曲线呈指数增长；

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

本产品仅限研究使用，不可用于临床诊断。

操作需在无RNase环境下进行，建议使用防污染试剂（如UDG酶）。

熔解曲线出现多峰时，需优化引物或重新提取RNA。

应用案例

适用于拉沙热病毒感染的细胞培养物、动物组织或临床样本的快速筛查与定量分析。

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