类天花病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

类天花病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

本试剂盒专用于类天花病毒（如猴痘病毒、牛痘病毒等）核酸的荧光定量PCR检测，适用于科研领域，不可用于临床诊断。

技术原理

采用染料法荧光定量PCR技术，通过双链DNA结合染料（如SYBR Green I）在扩增过程中释放荧光信号，实时监测靶基因扩增情况，结合标准曲线实现绝对定量。

产品特点

高灵敏度：检测下限可达几百拷贝/反应。

高特异性：针对类天花病毒保守序列设计引物，避免交叉反应。

便捷性：即开即用，用户仅需提供病毒核酸样本。

稳定性：-20℃保存，有效期12个月。

防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。

试剂盒组分

核心组分：预混qPCR Master Mix（含热启动Taq酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料）。

引物：针对类天花病毒靶基因设计的特异性引物。

阳性对照：含类天花病毒靶序列的标准品（用于建立标准曲线）。

阴性对照：无核酸酶水。

实验步骤

样本准备：提取待测样本核酸，建议使用柱式核酸提取试剂盒。

试剂解冻：实验前1小时将试剂盒置于室温平衡，避免反复冻融。

反应体系配制（20μL/反应）：

预混Master Mix：10μL

引物混合液：2μL

模板DNA：2μL

无核酸酶水：补足至20μL。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）；

熔解曲线分析（可选）：60℃~95℃，升温速率0.5℃/秒。

数据分析：通过标准曲线计算样本中靶基因拷贝数。

注意事项

移液精度：使用校准后的移液器（误差≤2%），更换枪头避免交叉污染。

避光操作：荧光染料需避光保存，反应管避免强光直射。

防污染措施：实验分区操作（样本处理区、PCR配制区、扩增区），使用带滤芯枪头。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（监控污染）和阳性对照（验证试剂有效性）。

储存条件

-20℃避光保存，避免反复冻融（分装后冻存建议≤3次）。

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