邻单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

邻单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，采用SYBR Green等荧光染料实时监测扩增产物。通过优化设计的特异性引物，可高效扩增Pleisiomonas spp.的保守基因序列，灵敏度达100拷贝/反应。扩增曲线与熔解曲线分析相结合，确保检测的特异性与准确性，适用于定性和定量分析。

试剂组成

2× SYBR qPCR MasterMix（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料）

荧光PCR专用模板稀释液（用于标准品制备或样品稀释）

阳性对照（含靶序列质粒，用于验证实验有效性）

阴性对照（无核酸酶水，排除污染干扰）

技术特点

高灵敏度：检测下限为100拷贝/反应。

高特异性：引物针对Pleisiomonas spp.高度保守区设计，避免交叉反应。

宽线性范围：定量分析时覆盖至少5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL）。

即用型设计：预混MasterMix简化操作流程，减少加样误差。

操作流程

样本制备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制（20 μL/反应）：

2× SYBR MasterMix：10 μL

引物混合液：2 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

熔解曲线分析：60℃~95℃，升温速率0.5℃/秒

结果判读

定性分析：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰，判为阳性。

定量分析：通过标准曲线计算模板初始拷贝数。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

实验需在无菌环境下操作，防止气溶胶污染。

建议使用ROX参比染料校正孔间荧光偏差（需仪器支持）。

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