牛轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

牛轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

保存条件：-20℃避光保存，有效期24个月

适用样本：牛粪便、肠道组织等含病毒核酸的样本

检测方法：染料法荧光定量RT-PCR

检测类型：支持定性与定量检测（定量线性范围≥5个数量级）

试剂盒组成

RT-PCR反应预混液：包含逆转录酶、热启动DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料等。

阳性对照：牛轮状病毒PCR阳性对照（1×10⁶拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

其他辅助试剂：如DEPC水、缓冲液等（具体以实际包装清单为准）。

实验操作流程

1. 样本制备

样本数量：若检测N个样品，需设置N+2个提取反应（额外1个阳性对照+1个阴性对照）。

阳性对照制备：取10μL阳性对照（1×10⁶拷贝/μL）稀释至与样本体积一致。

阴性对照：使用无核酸酶水。

核酸提取：推荐兼容市售细菌DNA提取试剂盒，按标准方法纯化核酸。

2. PCR扩增

反应体系：20μL/反应，包含模板DNA、预混液及对照。

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

3. 结果分析

电泳验证：取5-10μL扩增产物进行1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，预期产物长度约200bp。

阴性对照要求：若阴性对照出现扩增条带，表明污染，实验需重做。

定量分析：通过标准曲线计算病毒拷贝数（需用户自备标准品）。

注意事项

实验环境：严格分区操作（样本处理区、PCR扩增区），避免气溶胶污染。

质量控制：每次实验必须包含阴阳性对照。

应用限制：本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

存储与运输：避免反复冻融，运输需干冰保存。

技术参数

灵敏度：≤100拷贝/反应

特异性：不与牛其他常见肠道病原体交叉反应（如冠状病毒、诺如病毒）。

重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。

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