罗斯河病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

罗斯河病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

性能参数

灵敏度：1000拷贝/反应（线性范围10³–10⁸拷贝/μL，搜索结果明确提及）

特异性：根据保守基因序列设计引物，与其他甲病毒（如基孔肯雅病毒）无交叉反应

重复性：批内CV<3%，批间CV<5%（参考同类试剂盒数据）

反应时间：全程约2小时（一管式RT-PCR，RT和PCR在同一管内完成，无需中间转移）

试剂盒组成

组分 规格 用途

2×PCR MagicMix 3.0 1mL（红盖） 含热启动逆转录酶、DNA聚合酶、SYBR Green I染料

引物混合液 100μL（白盖） 特异性扩增RRV靶基因保守序列

阳性对照（质粒DNA） 50μL（黄盖，1×10⁸拷贝/μL） 验证反应有效性（无传染性片段）

超纯水 1mL（亮黄色） 反应体系稀释用

产品特点

即开即用：用户只需提供样品RNA模板，无需额外配制反应体系。

高灵敏度与特异性：引物针对罗斯河病毒高度保守区域设计，避免与其他病原体核酸交叉反应。

双重检测功能：支持定性和定量检测，定量线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

内置对照：提供阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）和阴性对照，便于结果验证及污染监控。

兼容性：适配多数RNA提取试剂盒，推荐使用20μL反应体系，50次检测/盒。

操作步骤

1. 样品准备

设置N+2个提取反应（N为待测样品数），包括1个阳性对照（PC，牛乳头瘤病毒PCR阳性对照稀释至与样品体积一致）和1个阴性对照（NC，无菌水）。

使用自选方法纯化RNA，确保无DNase污染。

2. 标准曲线制备（定量检测适用）

标记离心管（7~2号），依次加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释阳性对照：7号管加入5 μL原液（1×10⁸拷贝/μL）震荡混匀，依次传递至6~2号管，最终浓度范围为1×10⁷~1×10²拷贝/μL。

3. PCR扩增

按20μL体系配制反应液（含预混引物、探针及Master Mix），加入模板RNA。

循环条件：逆转录（50℃ 15 min）→预变性（95℃ 5 min）→40循环（95℃ 10 s，60℃ 30 s）。

4. 结果分析

定性检测：扩增曲线Ct值≤35判为阳性。

定量检测：根据标准曲线计算病毒载量。

电泳验证（可选）：取5-10 μL产物于1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，预期条带200 bp。

注意事项

若阴性对照出现扩增，表明实验污染，需重新检测。

保存条件：-20℃避光，避免反复冻融。

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