马动脉炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

马动脉炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测马病毒性动脉炎病毒（Equine Viral Arteritis Virus, EVA）RNA。该病毒为RNA病毒，可导致马匹发热、水肿、呼吸道症状及高流产率。本产品基于保守基因序列设计引物，具有高灵敏度和特异性，适用于科研、临床诊断及检疫。

检测原理

通过逆转录（RT）将病毒RNA转化为cDNA，再经荧光定量PCR扩增目标片段。染料（如SYBR Green）与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测荧光强度定量病毒载量。

试剂盒组成

RT-PCR预混液：含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及缓冲液。

引物混合液：针对EVA病毒保守序列设计。

阳性对照：非传染性DNA片段（86bp，10E8拷贝/μL）。

模板稀释液：用于标准品梯度稀释。

病毒裂解液试用装（可选）：兼容多数RNA提取试剂盒。

操作步骤

1. 样本制备

使用RNA提取试剂盒（如柱式病毒RNAout）提取样本RNA，溶于无RNase水中。

2. 阳性对照稀释

按10倍梯度稀释阳性对照（10E2-10E7拷贝/μL），标记为2-7号管，冰上保存。

3. RT-PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/对照 | 5 |

| 无RNase水 | 3 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ 15min | 1 |

| 预变性 | 95℃ 5min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 15s → 60℃ 30s | 40 |

5. 数据分析

使用仪器软件生成标准曲线，计算样本Ct值及病毒拷贝数。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制及扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批实验需包含阴性和阳性对照。

保存要求：反复冻融不超过3次，避免反复解冻预混液。

生物安全：阳性对照为灭活片段，但仍需按生物安全二级标准操作。

临床意义

快速检测EVA病毒有助于早期诊断和疫情控制，尤其对妊娠母马（流产率>90%）及马驹的防控至关重要。

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