禽腺病毒B型染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于禽腺病毒B型核酸的快速、高灵敏度检测。适用于科研、兽医诊断及流行病学监测等领域，可实现对病毒核酸的绝对或相对定量分析。

检测原理

染料法荧光定量PCR：采用DNA结合染料（如SYBR Green I）实时监测扩增产物，通过荧光信号变化定量目标基因。

标准曲线法：通过已知浓度的标准品建立标准曲线，计算待测样本中禽腺病毒B型的拷贝数。

试剂盒组分

主反应混合液：含预混PCR缓冲液、dNTPs、热启动DNA聚合酶及荧光染料。

禽腺病毒B型特异性引物：针对病毒保守序列设计，确保高特异性。

阳性对照：含禽腺病毒B型靶序列的重组质粒。

阴性对照：无核酸酶水。

RNA提取试剂（可选）：部分版本可能包含样本预处理组分。

操作步骤

样本准备：

提取待测样本RNA/DNA，建议使用商品化提取试剂盒。

阳性对照与阴性对照无需提取，直接使用。

反应体系配制（以50 μL为例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 主反应混合液 | 25 |

| 引物混合液 | 5 |

| 模板RNA/DNA | 10 |

| 无核酸酶水 | 10 |

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）；

熔解曲线分析（可选）：60℃~95℃，每0.5℃递增。

数据分析：

根据标准曲线计算样本中病毒核酸浓度，熔解曲线验证扩增特异性。

注意事项

实验前准备：

试剂盒需-20℃避光保存，使用前平衡至室温。

分装试剂避免反复冻融，移液器需校准（误差≤2%）。

操作规范：

严格分区操作（样本处理区、PCR配制区、扩增区），防止污染。

更换枪头避免交叉污染，扩增产物禁止开盖。

质量控制：

阴性对照无扩增曲线，阳性对照Ct值≤35方为有效。

性能参数

灵敏度：最低检测限≤10拷贝/μL。

特异性：不与常见禽类病原体（如新城疫病毒、传染性支气管炎病毒）交叉反应。

保存条件：-20℃保存，有效期12个月。

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