猪痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于猪痘病毒（Swine Pox Virus, SPV）核酸的定性及定量检测。通过优化引物和探针设计，确保高灵敏度和特异性，可有效区分假阴性样本，适用于科研用途。

试剂盒组成

PCR反应液：含预混PCR缓冲液、dNTPs、热启动DNA聚合酶及荧光染料（如SYBR Green）。

引物混合液：针对猪痘病毒高度保守区域设计的特异性引物。

阳性对照（1×10^8 拷贝/μL）：无传染性的DNA片段，需单独存放避免污染。

阴性对照：无模板核酸的缓冲液，用于监测交叉污染。

核酸释放剂（试用装）：支持20次样本核酸释放，兼容常规提取方法。

使用手册：含详细操作流程及数据分析方法。

操作步骤

样本制备

使用核酸提取试剂盒或本试剂盒提供的核酸释放剂制备待测DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

标准曲线制备（定量检测需选做）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2–10^7 拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

PCR反应体系配制（20 μL体系为例）

依次加入PCR反应液10 μL、引物混合液2 μL、模板DNA 2 μL、超纯水补足至20 μL。

扩增程序设置

预变性：95℃ 5分钟；循环阶段（40次）：95℃ 15秒→60℃ 30秒（采集荧光信号）。

数据分析

通过阈值循环数（Ct值）计算病毒拷贝数，标准曲线R²应≥0.99。

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融；阳性对照需单独存放。

防污染措施：操作分区进行（试剂配制区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

技术参数

灵敏度：最低检测限10拷贝/μL。

特异性：不与常见猪源病原体（如PPV、PRRSV）发生交叉反应。

线性范围：10^2–10^7 拷贝/μL（定量检测）。

常见问题

若扩增曲线异常，检查模板纯度或引物降解情况。

无信号时，确认荧光通道设置与染料匹配（如FAM/SYBR Green）。

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