马红球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

马红球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法，通过设计马红球菌基因保守区域的特异性引物，对靶标核酸进行实时荧光定量PCR扩增。扩增过程中释放的荧光信号由仪器实时监测，实现定性及定量分析。

试剂组成

A. 核心组分

预混反应液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲体系及SYBR Green染料（规格：950μL/管）。

扩增液：含特异性引物对（规格：50μL/管）。

阳性质控品：马红球菌标准核酸（1×10^8 拷贝/μL）。

B. 辅助组分

模板稀释液（RNase-free，用于样本稀释）。

操作步骤

1. 试剂准备

解冻：将试剂置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），避免反复冻融。

混匀：轻弹管壁后低速离心（1000 rpm，5秒）。

2. 反应体系配置（以20μL为例）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混反应液 | 10 |

| 扩增液（引物混合物） | 0.5 |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free H₂O | 7.5 |

3. PCR程序设置

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃/3 min | 1 |

| 变性 | 95℃/15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃/30 sec | |

4. 数据分析

使用仪器软件读取Ct值，通过标准曲线计算样本拷贝数。

注意事项

质量控制

每批次实验需设置阴性对照（NTC）及阳性质控品。

技术重复建议≥3次，确保数据可靠性。

存储条件

未开封试剂：-20℃避光保存（有效期12个月）。

开封后：分装冻存，避免反复冻融。

交叉污染防控

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

使用RNase-free耗材。

性能参数

灵敏度：≥100拷贝/反应。

特异性：与常见近源菌株无交叉反应。

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