组织胞浆菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

组织胞浆菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于组织胞浆菌（Histoplasma spp.）的快速、高灵敏度检测。适用于科研用途，可进行定性和定量分析，线性范围覆盖至少5个数量级。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板，预混优化引物及反应体系。

高灵敏度与特异性：引物针对组织胞浆菌高度保守区设计，避免交叉反应。

内置对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，便于排除假阴性。

全平台兼容：无需调节ROX，适配主流qPCR仪，96孔板复孔偏差Ct值<0.2。

快速检测：反应时间快至46分钟，标准曲线重复性优异。

组分清单

预混荧光定量PCR Master Mix（含染料）

组织胞浆菌特异性引物（10 μM）

阳性对照DNA（1×10^8拷贝/μL）

荧光PCR专用模板稀释液

RNase-free H₂O

说明书

操作步骤

1. 试剂准备

解冻与混匀：将预混液从-20℃取出，置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），轻颠倒混匀后短暂离心（1000 rpm，5-10秒）。

避免气泡：混匀时避免剧烈震荡，防止酶活性损失。

2. 标准曲线制备（以10^2–10^7拷贝/μL为例）

标记6管，分别加入45 μL稀释液。

取5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL）加入第1管，震荡混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次10倍稀释至10^2拷贝/μL。

所有稀释步骤需在独立区域操作，避免污染。

3. PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混Master Mix | 10 |

| 引物（上下游混合） | 0.8 |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free H₂O | 7.2 |

4. 上机程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析（可选）：60–95℃，每0.5℃递增。

注意事项

防污染：实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

稳定性：解冻后试剂需置于冰上，避免反复冻融。

应用限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

规格：50T/盒（20 μL/反应）

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

质量控制：批间差Ct值<0.5，熔解曲线单峰。

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