禽脑脊髓炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒用于检测禽类组织（如脑组织、胰腺、腺胃）及全血样本中的禽脑脊髓炎病毒RNA，适用于科研领域对AEV感染的辅助诊断，不用于临床诊断。

检验原理

采用一步法荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物及荧光染料对AEV RNA进行扩增检测，具有高灵敏度和特异性。

产品特点

即开即用：用户仅需提供病毒样本。

高特异性：引物针对AEV保守序列设计，无交叉反应。

高灵敏度：检测限可达几百拷贝/反应。

防污染设计：一管式封闭检测，避免扩增产物污染。

稳定保存：-20℃保存，有效期12个月。

试剂盒组成

2×qPCR MagicMix：500 μL（棕色管）

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）

AEV PCR引物混合物：100 μL（白盖）

AEV PCR阳性对照（1×10⁸ 拷贝/μL）：50 μL（红盖）

使用手册：1份

自备试剂

DNA/RNA模板

10×ROX（根据PCR仪器型号选择）

使用方法

1. 阳性对照稀释（标准曲线制备）

标记离心管（7-2号），每管加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释阳性对照（10⁸~10² 拷贝/μL）：

7号管：5 μL 10⁸ 拷贝/μL + 45 μL稀释液 → 10⁷ 拷贝/μL

依次稀释至2号管，获得6个浓度梯度。

2. 反应体系配制

每20 μL反应体系包含：

10 μL 2×qPCR MagicMix

2 μL引物混合物

2 μL模板（待测样本/对照）

6 μL无核酸酶水

3. 扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集荧光信号）

结果判读

Ct值≤35且扩增曲线呈S型：判定为阳性。

Ct值＞35或无扩增：阴性。

注意事项

操作分区进行（试剂配制区、模板添加区、扩增区），避免污染。

阳性对照需独立稀释，防止污染其他组分。

反复冻融不超过5次，-20℃避光保存。

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