人类嗜T淋巴细胞病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

检测靶标：HTLV-I/II 保守基因区域（如 tax、pol 或 LTR 基因）。

样本类型：人全血、血清、血浆、PBMC（外周血单核细胞）或组织提取物。

应用场景：

HTLV感染早期筛查与辅助诊断

献血员血液安全监测

流行病学研究及病毒载量定量分析（需标准品曲线）

检测原理

RNA提取：从样本中纯化病毒RNA。

反转录（RT）：将RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR：

引物：特异性扩增HTLV-I/II通用片段。

探针：标记荧光基团（如FAM）和淬灭基团（如BHQ1），实现实时信号检测。

扩增曲线：通过Ct值（循环阈值）判定病毒核酸存在与否。

试剂盒组分

| 组分 | 体积/数量 | 储存条件 |

| qRT-PCR反应液（预混） | 1管（含酶/dNTP/探针） | -20℃避光 |

| HTLV引物探针混合液 | 1管 | -20℃避光 |

| RT酶混合液 | 1管 | -20℃ |

| 阳性对照（HTLV RNA） | 1管 | -70℃（避免反复冻融） |

| 阴性对照（无RNA水） | 1管 | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1管 | 室温 |

储存及稳定性

未开封：-20℃保存12个月，避免反复冻融。

配制后：反应液需分装，-20℃保存≤3个月。

 需自备材料

RNA提取试剂盒（如柱式法）

实时荧光定量PCR仪（支持FAM通道）

无菌PCR管、离心机、移液器及滤芯吸头

生物安全柜（处理潜在感染性样本）

操作流程

graph TD

    A[样本RNA提取] --> B[配制RT反应体系]

    B --> C[42℃反转录15-30min]

    C --> D[95℃酶灭活5min]

    D --> E[配制qPCR反应体系]

    E --> F[荧光定量PCR扩增]

    F --> G[结果分析]

典型扩增程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 45 sec | |

| 荧光采集 | 60℃终点 | 读取信号 | |

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 38.0，且扩增曲线呈S"型。

可疑：Ct值 > 38.0，需重复检测。

阴性：无Ct值或Ct值≥40。

对照要求：

阳性对照：Ct值在预期范围内（如20-30）

阴性对照：无扩增（Ct=40）

性能参数

灵敏度：≤50 IU/mL（WHO标准品）

特异性：不交叉反应HIV/HBV/HCV/EBV等常见病毒。

检测限（LoD）：10-100 copies/mL（依而异）

注意事项

实验室分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区）

严格防污染：使用UNG酶防 Carryover（若试剂含该组分）

临床诊断需结合血清学结果（如ELISA/WB）

本试剂仅用于体外诊断

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