人副流感病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测人副流感病毒3型（HPIV-3）RNA，具有高灵敏度和特异性。适用于临床样本、流行病学调查及科研研究。

检测原理

通过逆转录（RT）将病毒RNA转化为cDNA，再经荧光定量PCR扩增目标序列。SYBR Green染料与双链DNA结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度定量病毒载量。

试剂盒组成

RT-PCR反应预混液（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

特异性引物（针对HPIV-3保守区域设计）

阳性对照（HPIV-3 RNA标准品）

阴性对照（无核酸酶水）

使用说明书

储存条件与有效期

保存于-20℃，避免反复冻融。

有效期12个月。

操作步骤

样本处理

在生物安全柜中操作，使用无核酶耗材。

样本（如咽拭子、鼻拭子）需在0-4℃条件下处理，避免RNA降解。

RNA提取

采用商业化RNA提取试剂盒，按说明书操作。

RT-PCR反应体系配制

在试剂准备区配制反应液（20μL体系），包括预混液、引物、模板RNA及对照。

瞬时离心混匀，避免气泡。

扩增程序设置

逆转录：50℃ 15分钟（可选）；预变性：95℃ 2分钟；PCR循环（40次）：95℃ 15秒→60℃ 30秒（采集荧光信号）。

仪器参数：ABI系列需关闭ROX校正，淬灭基因选择“None”。

结果分析

通过阈值循环数（Ct值）定量，Ct≤35为阳性，无扩增曲线为阴性。

注意事项

分区操作：试剂准备区、样本处理区、扩增区严格分离，避免污染。

对照设置：每批次实验需包含阴/阳性对照。

防污染措施：使用带滤芯吸头，避免裸手接触PCR管。

试剂批号：不同批号不可混用。

性能参数

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的HPIV-3 RNA。

特异性：引物经优化，与其他呼吸道病原体无交叉反应。

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