人副流感病毒4A型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于染料法荧光定量RT-PCR技术，针对人副流感病毒4A型基因组保守区域（如融合蛋白基因或血凝素-神经氨酸酶基因）设计特异性引物，通过SYBR Green等荧光染料实时监测扩增产物。病毒RNA经逆转录为cDNA后，通过PCR扩增产生荧光信号，实现病毒核酸的定性或定量检测。

试剂组成

反应液：含缓冲液、dNTPs、逆转录酶等（25T/盒：500μL×1管；50T/盒：500μL×2管）。

酶液：含热启动DNA聚合酶（25T/盒：25μL×1管；50T/盒：50μL×1管）。

阳性质控品：灭活HPIV-4A病毒核酸（250μL×1管）。

阴性质控品：无核酸酶水（250μL×1管）。

注：不同批号组分不可混用。

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议≤5次），有效期12个月。

适用仪器

ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96、安捷伦MX3000P等荧光定量PCR仪。

检测流程

样本采集：鼻咽拭子或呼吸道分泌物，需低温保存或立即处理。

核酸提取：推荐磁珠法或离心柱法提取病毒RNA。

RT-PCR反应：

配制反应体系：反应液、酶液、引物与模板RNA混合。

程序设置：逆转录（50℃ 15分钟）→预变性（95℃ 3分钟）→扩增循环（95℃ 15秒，60℃ 30秒，40个循环）。

结果分析：根据扩增曲线和Ct值判定样本阳性/阴性，定量需标准曲线。

性能参数

灵敏度：检测下限≤100 copies/mL。

特异性：不与HPIV-1/2/3型或其他呼吸道病原体交叉反应。

线性范围：10^1~10^6 copies/mL（定量检测适用）。

注意事项

实验需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

避免试剂反复冻融，解冻后需充分混匀。

阴/阳性质控品需与样本同步检测。

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