人副流感病毒4B型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检测原理

RNA提取：从样本（咽拭子、肺泡灌洗液等）中纯化病毒RNA。

RT-PCR扩增：

逆转录 (RT)：将病毒RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR：使用特异性引物探针组合靶向HPIV-4B保守区域（如L基因或HN基因），SYBR Green染料结合双链DNA发出荧光信号，实时监测扩增曲线。

结果判读：根据Ct值（循环阈值）和熔解曲线（Tm值）定性检测病毒核酸。

试剂盒组成

| 组分 | 体积/规格 | 主要成分 |

| HPIV-4B RT-PCR反应液 | 600 μL/tube | SYBR Green荧光染料、dNTPs、缓冲液 |

| RT-PCR酶混合液 | 100 μL/tube | 逆转录酶、Taq DNA聚合酶、RNase抑制剂 |

| HPIV-4B阳性对照 | 50 μL/tube | HPIV-4B假病毒RNA |

| 阴性对照 | 50 μL/tube | DEPC水或RNase-free水 |

| RNase-Free水 | 1 mL/tube | 无核酸酶水 |

样本要求

样本类型：鼻咽拭子、咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液（BALF）。

保存与运输：2~8℃保存≤72小时，长期存储需-80℃冷冻。

RNA提取：推荐使用商品化RNA提取试剂盒（如QIAamp Viral RNA Kit）。

操作步骤

RNA提取（按提取试剂盒说明书操作）→ 获得RNA模板。

反应体系配制（冰上操作）：

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 15 |

| 酶混合液 | 2 |

| RNA模板/对照 | 3 |

| 总体积 | 20 |

PCR程序设置：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| PCR扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 |

| | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线分析 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升/5 sec | 1 |

结果判读

阳性：

Ct值 ≤ 35.0，且熔解曲线Tm值符合HPIV-4B标准峰（如：85±1℃）。

可疑：

Ct值 35.1~38.0，需复测确认。

阴性：

无Ct值或Ct值≥38.0，熔解曲线无特异性峰。

注：阴性对照（Ct=无）、阳性对照（Ct≤30）有效时结果成立。

性能参数

灵敏度：检出限（LOD）≤ 50 copies/mL。

特异性：不与HPIV-1/2/3、流感病毒、RSV、腺病毒等交叉反应。

重复性：CV值 ≤ 5%。

注意事项

严格分区操作（试剂准备区→样本处理区→扩增区），避免污染。

穿戴防护装备（手套、口罩），废弃组分按生物危害物处理。

试剂使用前充分混匀，避免反复冻融。

本试剂盒仅用于科研，不适用于临床诊断。

储存与有效期

储存条件：-20℃避光保存（避免反复冻融＞3次）。

有效期：12个月。

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