水痘-带状疱疹病毒野生株染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于检测水痘-带状疱疹病毒（Varicella-Zoster Virus, VZV）野生株核酸。通过优化引物设计及反应体系，可实现高灵敏度、高特异性的定量或定性检测，适用于临床样本、疫苗质量控制及科研领域。

试剂盒组成

荧光定量PCR预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。

阳性对照：浓度为1×10^8拷贝/μL的VZV野生株核酸。

阴性对照：无核酸酶水。

标准曲线稀释液：用于梯度稀释阳性对照，构建标准曲线。

说明书及数据分析表。

注：具体组分以实际包装为准，需核对批次信息。

操作步骤

1. 标准曲线制备

标记6支离心管（7号至2号），每管加入45 μL专用稀释液。

取5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL）加入7号管，震荡混匀，得到1×10^7拷贝/μL的标准品。

依次梯度稀释至2号管，获得1×10^6至1×10^2拷贝/μL的系列浓度标准品，冰上保存备用。

2. 样本DNA制备

使用兼容的核酸提取试剂纯化样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280比值1.8-2.0。

3. PCR扩增

反应体系（20 μL）：10 μL预混液 + 2 μL模板DNA + 8 μL无核酸酶水。

循环条件：

95℃预变性5分钟；

95℃ 10秒，60℃ 30秒（40个循环），于延伸阶段采集荧光信号。

数据分析

定量检测：以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本拷贝数。

定性判定：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型S型；

阴性：Ct≥40；

灰区（35<Ct<40）：需重复检测，若重复Ct<40则判为阳性。

性能参数

灵敏度：最低检测限100拷贝/反应。

特异性：引物针对VZV野生株保守序列设计，与疫苗株及其他疱疹病毒无交叉反应。

稳定性：-20℃保存有效期12个月，避免反复冻融。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，防止污染。

不同机型可能需调整ROX参考染料浓度（详见仪器说明书）。

若用于临床诊断，需结合其他检测方法及临床症状综合判断。

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