线粒体呼吸链复合物V测定试剂盒/10样 新品

线粒体呼吸链复合物I测定试剂盒/10样

测定原理：

线粒体呼吸链复合物 V，通常称为 ATP 合成酶（ATP synthase）、F 型 ATP 酶（F type ATPase）和 F1F0 ATP 酶（F1F0 ATPase），是线粒体氧化磷酸化的终极反应。其分子量为 500KD，含有十六个亚单位，其中两个：ATP酶 6 和8 为线粒体 DNA 编码的。ATP 酶主要有两个结构域：F0 为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括 a 、 b 、c 、d 、e 、F6 、A6L 、OSCP（oligomycin sensitive conferring protein）等；和 F1 催化活性结构域，由水溶性的α3 β3 γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的 ATP 合成酶。

自备仪器用品：

比色皿、培养箱、双波长分光光度仪。

实验步骤：
（一）、背景对照测定：

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

5、加入 100  微升阴性液（Reagent C）

6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

7、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：340  波长读数 0  分钟 －340  波长读数 1  分钟或 5  分钟

（二）、样品总活性测定：

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

5、加入 100  微升待测样品（注意：10  微克总线粒体蛋白）

6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

7、即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：340  波长读数 0  分钟 －340  波长读数 1  分钟或 5分钟

（三）、样品非特异活性测定：

实验开始前，移取 100  微升待测样品（注意：10  微克总线粒体蛋白）到 1.5  毫升离心管，加入 20  微升专性液（Reagent E），混匀后，放进 30℃培养箱里孵育 15  分钟。然后置于冰槽里备用

1、移取 760  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

5、加入 120  微升上述预处理的待测样品

6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

7、即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：340  波长读数 0  分钟 －340  波长读数 1  分钟或 5 分钟。