线粒体呼吸链复合物I测定试剂盒/10样

线粒体呼吸链复合物I测定试剂盒/10样

测定原理：

线粒体呼吸链复合物 I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶 Q 还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase, NADH-CoQreductase）， 又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有 30 至 40 多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的 NADH－辅酶 Q 还原酶（NADH:Q Reductase）。

自备仪器用品：

比色皿、培养箱、双波长分光光度仪。

实验步骤：
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（Reagent A）室温预热；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。

（一）、背景对照测定

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

5、加入 100  微升阴性液（Reagent C）

6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

7、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：（340  波长读数－380  波长读数）0  分钟－（340  波长读数－380  波长读数）1  分钟或 3  分钟

（二）、样品总活性测定

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

5、加入 100  微升待测样品（注意：10  微克总线粒体蛋白）

6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

7、即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：（340  波长读数－380  波长读数）0 分钟－（340  波长读数－380  波长读数）1  分钟或 3  分钟