线粒体呼吸链复合物II测定试剂盒/20样

线粒体呼吸链复合物II测定试剂盒/20样

测定原理：

线粒体 呼吸链复合物 II ，通常称为琥珀酸 －辅酶 Q 还原酶或琥珀酸脱氢酶（ Succinate-Coenzyme Q Reductase ；Succinate Dehydrogenase），是线粒体电子传递链与三羧酸循环链接的载体：含有四个亚单位，包括共价结合的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide ；FAD） 和三个铁硫中心（ Fe-S  clusters），以及细胞色素 b 亚单位，其最特征性的酶活性是丙二酸钠敏感的琥珀酸－辅酶 Q 还原酶。

自备仪器用品：

比色皿、双波长分光光度仪、培养箱。

实验步骤：

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；缓冲液（Reagent A）室温预热；反应液（Reagent B）和底物液（Reagent D）注意避光。然后进行下列操作。
（一）、背景对照测定

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、上下倾倒数次，混匀

5、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

6、加入 100  微升阴性液（Reagent C）

7、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

8、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：600  波长读数 0  分钟－600  波长读数 1  分钟或 5  分钟

（二）、样品活性测定

1、移取 780  微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿

2、加入 100  微升反应液（Reagent B）

3、加入 20  微升底物液（Reagent D）

4、上下倾倒数次，混匀

5、放进 30℃培养箱里静置 3  分钟

6、加入 100  微升待测样品（注意：10  微克总线粒体蛋白）

7、上下倾倒数次，混匀（限定在 3  秒之内）

8、即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：600  波长读数 0  分钟－600  波长读数 1 分钟或 5分钟。