谷胱甘肽还原酶(GR)测定试剂盒/分光光度法/48样 新品

谷胱甘肽还原酶(GR)测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

GR 是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR 被 TrxR 取代）。GR 催化 NADPH 还原 GSSG 生成 GSH ，有助于维持体内 GSH/GSSG 比值。GR 在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外 GR 还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

测定原理：

GR 能催化 NADPH 还原 GSSG 再生 GSH ，同时 NADPH 脱氢生成 NADP+；NADPH 在 340 nm有特征吸收峰，相反 NADP+在该波长无吸收峰；通过测定 340 nm 吸光度下降速率来测定 NADPH 脱氢速率，从而计算 GR 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：
1. 分光光度计预热 30 min ，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 25℃（普通物质）或者 37℃（哺乳动物）中预热 30min。

3. 测定管：取 1mL 石英比色皿，依次加入 50μL 试剂三，100μL 试剂二， 750μL 试剂一，100μL 上清液，混匀，于 340nm 迅速测定初始吸光度和 180 s 吸光度，记为 A 测 1 和 A 测 2，△A 测定管=A 测 1 -A 测2 。(注意 ：加完上清液后迅速混匀测定)。

注 意：
(1)样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融。

(2)试剂二和试剂三须现配现用，配制完后，置于冰上，未使用完的 4℃保存，三天内使用完。

(3)测定前须先用 1～2 个样做预实验，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释 2～5 倍。

(4)细胞中 GR 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GR 的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。